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    吸煙雖然可以滿足吸煙者的某些需要，但它對(duì)己對(duì)人帶來(lái)的危害，是不容爭(zhēng)辯的事實(shí)。研究證實(shí)，吸煙過(guò)程產(chǎn)生含有包括超氧自由基在內(nèi)的復(fù)雜有害成分的煙氣,可導(dǎo)致人體多種疾病發(fā)生，而支氣管、肺組織作為煙霧直接作用器官，受害程度尤為嚴(yán)重。吸煙所致肺氧化損傷實(shí)質(zhì)上是煙霧刺激氣道后氧化應(yīng)激過(guò)強(qiáng)所致以巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主的多種炎癥細(xì)胞參與的氣道慢性炎癥反應(yīng)［1］。中醫(yī)中藥在抗氧化抗炎方面具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，因此，挖掘祖國(guó)醫(yī)藥寶庫(kù)，從中尋找對(duì)抗煙葉燃燒產(chǎn)生的超氧陰離子自由基的有效藥物，抑制氣道炎癥，成為防治吸煙造成肺損傷的重要途徑之一。本文通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，建立小鼠香煙煙霧肺損傷模型，觀察了中藥魚(yú)腥草對(duì)吸煙小鼠肺組織氧化損傷的保護(hù)作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

　　1  材料與儀器

　　1.1 藥品及試劑

　　魚(yú)腥草，由廣東醫(yī)學(xué)院藥理教研室提供。粉碎，加水10倍，加熱提取，1 h/次，共提取3次，合并3次濾液，濃縮成含生藥100%提取液，4℃冰箱保存。其余試劑均采用國(guó)產(chǎn)分析純。SOD、MDA、GSH-Px檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

　　1.2 儀器

　　752型分光光度計(jì)，勻漿器、電磁振蕩器等。小鼠吸煙箱，自制，容積10 L，有機(jī)玻璃制成，頂部安裝玻璃漏斗存放煙絲，底部與抽風(fēng)系統(tǒng)相連，可以模擬人的吸煙速度，能使主流、測(cè)流煙霧全部進(jìn)入吸煙箱內(nèi)，下側(cè)部有一直徑5 cm的孔與大氣相通。

　　1.3 煙絲

　　廣東省廉江煙絲廠生產(chǎn)。

　　1.4 動(dòng)物

　　昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

　　2 方法

　　2.1 分組昆明種小鼠60只。觀察3 d無(wú)異常后，按體重隨機(jī)分3組，即正常對(duì)照組（A組）、吸煙模型組（B組）、吸煙加魚(yú)腥草組（C組），每組20只，雌雄分籠飼養(yǎng)。B組和C組均連續(xù)吸煙60 d，8次/d（上午4次，下午4次），15 min/次，每次煙熏后換氣休息15 min；吸煙前，B組用0.1 ml/10 g體重生理鹽水灌胃，C組用0.1 ml/10 g體重魚(yú)腥草提取液灌胃，2次/d。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，動(dòng)物自由進(jìn)食飲水，每10天稱體重，30 d時(shí)，采血測(cè)血清硫氰酸根離子（SCN-）含量以觀察模型的制成。處死前稱重。
   
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第2天，眼眶采血并宰殺動(dòng)物，以1%肝素抗凝、3 000 r/min離心10 min制備血清；取出肺組織稱重，剪取部分右肺，用預(yù)冷生理鹽水制成10%的肺組織勻漿，-80℃凍存待測(cè)。

　　2.2  測(cè)定指標(biāo)及方法

　　血清中的硫氰酸根離子（SCN-）含量測(cè)定參照Bowler的硝酸高鐵鹽顯色法測(cè)定［2］。勻漿中的SOD活性、MDA含量、GSH-Px活性的測(cè)定均按試劑盒方法進(jìn)行。數(shù)據(jù)±s以 表示，組間差異采用t檢驗(yàn)比較。

　　3 結(jié)果

　　3.1 實(shí)驗(yàn)小鼠血清SCN-含量測(cè)定結(jié)果

　　小鼠血清SCN-含量測(cè)定見(jiàn)表1，吸煙30 d時(shí)，B、C組的小鼠的血清SCN-含量均高于40 ng/ml，顯著高于A組（P＜0.05）。吸煙60 d后，B、C組的小鼠的血清SCN-含量增高到50 ng/ml左右，極顯著高于A組（P＜0.01）。表明小鼠已經(jīng)有效吸入香煙煙霧。表1  小鼠血清SCN-含量（略）

　　3.2  吸煙小鼠體重和肺重的變化

　　實(shí)驗(yàn)期內(nèi)動(dòng)物攝食、飲水及活動(dòng)等均未見(jiàn)異常。各組小鼠體重增長(zhǎng)情況見(jiàn)表2。吸煙30 d后，吸煙各組的體重增長(zhǎng)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差別，吸煙60 d后，吸煙模型組小鼠體重明顯低于正常給藥組（P＜0.05），C組和正常對(duì)照組的體重?zé)o顯著性差異。各組小鼠肺重的情況見(jiàn)表3。B、C組肺重均低于A組，其中，B組和正常對(duì)照組之間有顯著差異（P＜0.05）。表2  實(shí)驗(yàn)期小鼠的體重變化（略）表3  吸煙對(duì)小鼠的肺重的影響（略）

　　3.3 小鼠肺組織中的生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

　　各組小鼠肺組織的MDA含量、SOD活性以及GSH-Px活性比較見(jiàn)表4。結(jié)果表明，B組小鼠肺組織中的MDA含量顯著高于對(duì)照組A組（P＜0.05）, SOD活性、GSH-Px活性顯著性的低于A組；C組小鼠肺組織中MDA含量、SOD、GSH-Px活性水平接近A組，說(shuō)明了魚(yú)腥草對(duì)被動(dòng)吸煙小鼠的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷有保護(hù)作用。表4  小鼠肺組織中的MDA含量、SOD活性和GSH-Px活性（略）

　　4 討論
   
　　香煙的煙霧中含有數(shù)千種對(duì)人體的健康具有嚴(yán)重危害的復(fù)雜化學(xué)物質(zhì)，氫氰酸是其中之一，它在體內(nèi)被肝臟解毒，而生成硫氰化物。SCN-的半衰期較長(zhǎng)，可達(dá)10～14 d，因此可以通過(guò)測(cè)定血清的SCN-含量考察吸煙模型是否建立。本研究中染毒小鼠吸煙模型的設(shè)計(jì)符合實(shí)驗(yàn)要求。

　　大量文獻(xiàn)報(bào)道吸煙會(huì)影響動(dòng)物機(jī)體的正常代謝，導(dǎo)致吸煙者體重下降［3］。本次研究中也發(fā)現(xiàn)了煙霧使小鼠體重和肺重明顯減輕的現(xiàn)象。而服用魚(yú)腥草的小鼠這種減輕趨勢(shì)明顯減緩，魚(yú)腥草對(duì)抗煙霧對(duì)小鼠的體重，特別是肺重的減輕作用是否同它的抗氧化損傷作用相關(guān)，還是同其直接影響小鼠的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。
   
　　機(jī)體抗氧化系統(tǒng)主要包括SOD和GSH-Px等，它們協(xié)調(diào)作用共同完成體內(nèi)的抗氧化任務(wù)。SOD是存在于生物體內(nèi)的一種重要的金屬酶，它能催化生物氧化而產(chǎn)生的陰離子自由基O2-·轉(zhuǎn)變成H2O2和H2，進(jìn)一步由GSH-Px分解H2O2或LOOH為水或醇(LOH)，起到消除自由基的毒性，保護(hù)細(xì)胞的作用。GSH-Px的主要功能是清除生物體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化物，其抗自由基損傷的機(jī)制為：脂質(zhì)過(guò)氧化物在GSH-Px的催化下，從NADPH接受氫而重新被還原為GSH。GSH的主要生理作用是對(duì)抗氧化劑對(duì)-SH的破壞，保護(hù)細(xì)胞膜中含-SH的蛋白質(zhì)和酶不被自由基和其它氧化劑所破壞。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其水平的高低間接反映機(jī)體內(nèi)自由基生成與清除的平衡狀態(tài)。
   
　　吸香煙時(shí)，吸入的煙霧中含有大量的自由基，機(jī)體長(zhǎng)期處于過(guò)度氧負(fù)荷狀態(tài)，這使體內(nèi)的抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶類耗竭或失代償。而當(dāng)自由基的數(shù)量超過(guò)體內(nèi)氧化防御能力，則可對(duì)生物大分子物質(zhì)如DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂肪造成損傷，這就是吸煙相關(guān)慢性病發(fā)生的基礎(chǔ)，故抗氧化功能已成為吸煙危害研究的重要觀察指標(biāo)［4］。本研究觀察到小鼠長(zhǎng)期被動(dòng)吸煙可造成體內(nèi)自由基代謝失常，表現(xiàn)為吸煙模型組的肺組織中SOD和抗氧化酶GSH-Px活力下降，MDA含量增多，表明其受自由基攻擊，體內(nèi)抗氧化酶類被耗竭或被自由基損傷后活性降低及合成減少。而小鼠在吸煙過(guò)程中同時(shí)給予魚(yú)腥草灌胃時(shí)，其肺組織的SOD活性、GSH-Px活性升高，提示魚(yú)腥草可通過(guò)捕捉自由基而減輕因吸煙造成的自由基增加和抗氧化酶活性降低的影響。
   
　　魚(yú)腥草中含有多種黃酮類物質(zhì)，魚(yú)腥草花、葉和果中含有槲皮素、槲皮苷、異槲皮苷、瑞諾苷、金絲桃苷、阿芙苷和蘆丁等［5，6］。黃酮類化合物有很好的清除自由基和抗氧化能力,能阻止自由基在體內(nèi)的產(chǎn)生，其作用機(jī)理包括:與超氧陰離子(O2-·)反應(yīng)阻斷自由基引發(fā)的連鎖反應(yīng)；與金屬離子螯合阻斷自由基生成；與脂質(zhì)過(guò)氧基(RO·)反應(yīng)阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。但魚(yú)腥草抗氧化的作用報(bào)道較少。本研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)腥草組MDA含量明顯低于吸煙組，與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異，表明魚(yú)腥草不僅可保護(hù)吸煙對(duì)機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，還可以降低機(jī)體自身的脂質(zhì)過(guò)氧化水平。

　　綜上所述，吸煙的煙霧在減輕動(dòng)物體重的同時(shí)，還可以造成體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，而魚(yú)腥草可以有效地減輕香煙煙霧對(duì)肺組織造成的這種氧化損傷。

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