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癌癥的中藥治療03 復(fù)方中藥行動物抑瘤的實(shí)驗(yàn)研究
復(fù)方中藥行動物抑瘤的實(shí)驗(yàn)研究
以動物移植性腫瘤模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn),篩選抗癌中藥,仍是目前研究腫瘸防治的重要方法,但迄今主要用于單味中藥的篩選,至于對復(fù)方中藥進(jìn)行一定規(guī)模的、較系統(tǒng)的篩選研究,尚少報(bào)導(dǎo),而我國中醫(yī)幾千年來都是采用復(fù)方給藥,因此我們認(rèn)為篩選復(fù)方中藥似乎更符合中醫(yī)的經(jīng)驗(yàn),為此,從1980年7月以來,對30組復(fù)方中藥及8種單味藥進(jìn)行了動物抑瘤實(shí)驗(yàn),以尋求療效佳良的抗癌藥物。
一、材料與方法
(一)藥物判備
選擇由文獻(xiàn)報(bào)告和臨床常用于抗癌的中藥,也有部分藥物尚無明確的抗癌作用,用于篩選的中藥主要的來自本地藥材公司,僅少數(shù)(如烏骨藤、姜石粉)從產(chǎn)地采集,其中復(fù)方烏骨藤用原藥(針劑)、姜石粉用0.25%水溶液,此外,其他復(fù)方中藥皆由本院制劑室,采水提醇沉法制成中藥復(fù)方粗制劑的注射液。以“瑞香狼毒、土茯苓”為例,介紹具體操作方法如下:
取洗凈之瑞香狼毒125克、土茯苓1125克,浸泡注射用水中1-2小時(shí)后蒸煮2次,每次l小時(shí).蒸液合并,取上清液過濾,加溫濃縮至300-500毫升,加酒精濃度至70%,放置沉淀48小時(shí)以上,過濾,回收酒精,加適量注射用水至300-500毫升,加氨沉淀(pH=9.0),過濾、去氨(pH=7.O),過濾,分裝20毫升,100℃、30分鐘滅菌,制成“瑞香狼毒、土茯苓”注射液(每毫升含1克生藥)。
其他組中藥復(fù)方制劑,制做方法雷同。
(二)給藥劑量
每組中藥復(fù)方注射液,皆對小鼠進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)后,確定實(shí)驗(yàn)用藥的適當(dāng)劑量。我們采用半數(shù)致死量(LD50)的1/3-1/5,為每日治療劑量,其他對照藥物亦是如此,以便對比。所有實(shí)驗(yàn)動物在用藥過程中,均無明顯藥物中毒反應(yīng),實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)生存情況良好,體重增加。
(三)腫瘤模型
用中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供的小鼠肉瘤-180(s-180),小鼠宮頸癌-14(U14),里澳-1號(Lgo-l)、小鼠艾氏腹水癌(EAc)及小鼠肝癌等為實(shí)驗(yàn)瘤株。
(四)實(shí)驗(yàn)對象
以本院動物室飼養(yǎng)繁殖的健康無傷之18-22克昆明雜種小白鼠(雌雄兼有)為實(shí)驗(yàn)對象。每試驗(yàn)組需動物10只,對照組動物根據(jù)試驗(yàn)組數(shù)多少決定,參照公式;
/---------
對照組鼠數(shù)=試驗(yàn)組鼠數(shù)×√試驗(yàn)組數(shù)
我們以30組復(fù)方及8種單藥行抑癌實(shí)驗(yàn)(包括毒性實(shí)驗(yàn))共用小鼠3000余只。
(五)接種方法
實(shí)體瘤:取接種10-12天的瘤源,在無菌操作下,選擇生長良好的瘤組織,放在研磨器中,接1:3的比例加入滅菌生理鹽水,制成瘤細(xì)胞懸液,給每只小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2毫升。
腹水瘤:取接種后8-10天生長良好的乳白色之腹水瘤源,以滅菌生理鹽水1:1-4稀釋,或進(jìn)行瘤細(xì)胞計(jì)數(shù),每毫升約含2500萬瘤細(xì)胞,每只小鼠腹腔注入0.2毫升(即細(xì)胞數(shù)約500萬)。
(六)給藥途徑及方法
接種后24小時(shí),隨機(jī)分組、稱體重,開始給藥,以上述動物瘤株,對38組中藥制劑分別以各種途徑如iv(靜脈)、ip(腹腔)、im(肌肉)、及po(灌胃)等方法給藥治療。并設(shè)對照組,包括相應(yīng)的給以生理鹽水及其他藥物組(如農(nóng)吉利注射液、硫酸醛基長春堿及去甲基斑蝥素注射液),用藥每日1次,連續(xù)9-15天,實(shí)體瘤于末次給藥后次日稱體重、處死動物,剝離瘤體、稱重。腹水瘤則于末次給藥后,繼續(xù)觀察,并記錄生存天數(shù)。
(七)療效判定
以1978年全國抗癌藥物研究協(xié)作會議制定的《抗腫瘤藥物體內(nèi)篩選規(guī)程》的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定。其療效指標(biāo)為;
1、實(shí)體瘤:以2組平均瘤重計(jì)算其抑制率,如果抑制率在80%以上,動物體重減輕不超過原體重15%,死亡不超過20%,亦無因藥物中毒死亡者,應(yīng)認(rèn)為有效,應(yīng)做重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
抑制率的計(jì)算公式如下:
對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重
抑制率(%)=------------------------------------ x100%
對照組平均瘤重

2、腹水瘤;以腫瘤動物的生命延長時(shí)間為標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算公
式;
給藥組動物平均生存天數(shù) - 對照組動物平均生存天數(shù)
生命延長率(%)= ------------------------------------------------------- x100%
對照組動物平均生存天數(shù)
一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
30組復(fù)方中藥及8種單味中藥經(jīng)過篩選實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,可分為3類:第一類是能抑制動物某種移植性腫瘤生長的藥物;第二類是對某些移植注腫瘤抑制率在25%以下,抗腫瘤作用尚不能肯定;第三類是對所用的數(shù)種模型,各途徑給藥均無抑制腫瘤生長的作用。以下分別敘述:
(一)有顯著抑瘤作用的藥物
1、瑞香狼毒、土茯苓:10-12克/公斤/日,對小鼠肝癌iV給藥,抑制率為38.7-43.3% (P<0.05)。
2.蘇木、茜草;7.5克/公斤/日,對小鼠肝癌iV給藥,抑制率為35.6-48.O%(P<0.05)iP給藥抑制率為25.O%。
3、海藻,皂刺、夏枯草:5克/公斤/日,對小鼠S-180于iV給藥,抑制率為30.4-32.2%(P<O.05)。
4。黃連、黃柏;3.33克/公斤/日,對小鼠EAC于iV給藥,生命延長率為32.0-47.2%(P<0.05)。
(二)有低度抑瘤作用的藥物
瓜萎、苦參:12-15克/公斤/日,對小鼠S-180于iv給藥抑制率為19.0%、22.7%、24.0%,ip抑制率為19.O%,po抑制率為11.0%,im抑制率為11.4%。
(三)無抑瘤作用的藥物
1劉寄奴、元胡,五靈脂。
2柞木枝、刺五加。
3知母、升麻。
4黃芪、仙鶴革。
5黃連、黃柏、人參皂甙。
6土元、水蛭。
7狼毒、薏米。
8魚腥草、敗醬草。
9大云、靈仙,
10苦參、刀豆、補(bǔ)骨脂。
11瓜簍、訶子。
12魚腥草、葶藶子。
13半夏、烏頭。
14紅芽大戟、山慈菇。
15百部、馬兜鈴、馬勃。
16銀柴胡、防已。
17檳榔、川樸。
18大風(fēng)子、膽礬。
19鬼箭羽、辛夷。
20青胡桃、刺五加。
21貫眾、使君予。
22桑寄生、淫羊藿、菟絲子。
23木別子、五味子。
24香附、木賊。
25活血湯。
26黃腐酸鈉。
27復(fù)方烏骨藤。
28人參皂甙。
29姜石粉。
30硅酸鈉。
31亞硒酸鈉,
32硅酸鈉、亞硒酸鈉(詳見表1)。
表1 復(fù)方中藥為主對動物植移腫瘤的抑制情況
---------------------------------------------------------
藥物名稱 腫瘤 給藥途徑 抑瘤率(%)
---------------------------------------------------------
蘇術(shù)、茜草 肝癌 ip 25.0
iv 35.6 36.6 48.0
EAC ip 0
iv 0
S-180 ip 0
iv 0
黃連、黃柏 EAC iv 22.0 38.2 47.2
肝癌 iv 0
狼毒,土獲苓 肝癌 iv 43.3 38.7 41.O
ip 0
S-180 iv 0
ip 0
EAC iv O
ip 0
海藻,皂剃,夏枯草 S-180 iv 30.4 32.2
EAC iv 0
肝癌 iv 0
瓜蔞、苦參 s-180 iv 19.0 22.7 24.0
ip 19.0
po 11.0
im 11.4
EAC iv 0
ip 0
po 0
im 0
去甲基斑蝥素 S-180 iv 32.34 27.10 26.47 30.03
肝癌 iv 33.65
劉寄奴、元胡、五靈脂 S-180 iv 0
ip 0
lg0-1 iv 0
ip 0
EAC iv 0
ip 0
肝癌 iv 0
ip 0
柞木枝,刺五加 s-180 iv 0
ip 0
po 0
U14 iv 0
ip 0
po 0
知母、升麻 肝癌 iv 0
S-180 iv 0
黃芪、仙鶴草 s-180 iv 0
ip 0
po 0
肝癌 iv 0
ip 0
po 0
黃連、黃柏、人參皂甙 U14 iv 0
ip 0
po 0
s-180 iv 0
ip 0
po 0
復(fù)方烏骨藤 U14 iv 0
ip 0
po 0
人參皂甙 U14 iv 0
ip 0
po 0
S-180 iv 0
ip 0
po 0
土元、水蛭 EAC iv 0
ip 0
po 0
im 0
狼毒、薏米 肝癌 iv 0
ip 0
po 0
im 0
EAC iv 0
ip 0
po 0
im 0
魚腥草、敗醬草 EAC iv 0
ip 0
po 0
s-180 iv 0
ip 0
po 0
肉蓯蓉、靈仙 S-180 iv 0
ip 0
po 0
U14 iv 0
ip 0
po 0
苦參、刀豆、補(bǔ)骨脂 S-180 iv 0
ip 0
肝癌 iv 0
ip 0
瓜蔞、訶子 EAC iv 0
ip 0
lgo-1 iv 0
ip 0
魚腥草、葶藶子 s-180 iv 0
ip 0
肝癌 iv 0
ip 0
硅酸鈉、亞硒酸鈉 EAC iv 0
po 0
S-180 iv 0
po 0
姜石粉 U14 ip 0
po 0
s-180 ip 0
po 0
檳榔、川樸、大風(fēng)子、膽礬lgo-1 ip 0
po 0
S-180 ip 0
po 0
青胡桃、刺五加 s-180 ip 0
po 0
鬼箭羽、幸夷 s-180 ip 0
po 0
桑寄生、淫羊藿、菟絲子S-180 ip 0
po 0
貫眾、使君子 s-180 ip 0
po 0
木鱉子、五味子 S-180 ip 0
po 0
半夏、烏頭 lgo-1 ip 0
po 0
百部、馬勃、馬兜鈴 U14 iv 0
ip 0
po 0
im 0
S-180 iv 0
ip 0
po 0
im 0
銀柴胡,防己 肝癌 iv 0
ip 0
lgo-1 iv 0
ip 0
亞硒酸鈉 U14 iv 0
ip 0
S-180 iv 0
ip 0
硅脧鈉 S-180 iv 0
ip 0
紅芽大戟、山慈菇 U14 iv 0
po 0
香附、木賊 s-180 iv 0
ip 0
黃腐酸鈉 U14 iv 0
ip 0
lgo-1 iv 0
ip 0
活血湯 U14 iv 0
ip 0
po 0
(四)對照用藥組
1.長春新堿(產(chǎn)自上海第十二制藥廠):0.166毫克/公斤/日,共用8次,對小鼠肝癌iv給藥之抑制率為45.32%,對S-180之iv給藥抑制率為48.88%。
2.農(nóng)吉利(產(chǎn)自濟(jì)南人民制藥廠);5毫升/公斤/日對小鼠肝癌ip給藥抑制率為41.39%,對S-180ip給藥之抑制率為34.08%。
3、去甲基斑蝥素(產(chǎn)自北京第四制藥廠):1毫克/公斤/日對小鼠肝癌iv給藥抑制率為33.65%,對S-180iv給藥之抑制率為32.34%、36.03%。
三、復(fù)方中藥篩選的意義
(一)發(fā)掘新的抗癌中藥
抗癌中草藥篩選規(guī)定抑瘤率選30%以上即認(rèn)為初篩有效,據(jù)此,本實(shí)驗(yàn)的30組復(fù)方中藥及8種單味藥物中,從重復(fù)的抑瘤數(shù)據(jù)中可知“瑞香狼毒、上茯苓”、“蘇木、茜草”對小鼠肝癌,“海藻、皂剌、夏枯草”對小鼠肉瘸180,“黃連、黃柏”對艾氏腹水癌確有抑制作用和生命延長作用。其中“瑞香狠毒、土茯苓”(43.3%)、“蘇木、茜草”(48.0%)對小鼠肝癌的抑制率要比農(nóng)吉利(41.39%)、去甲基斑蝥素(33.65%)對肝癌的抑制率還高,而比長春新堿(45.32%)相近或略高。我們曾考慮復(fù)方中藥僅粗制劑的抑瘤率就比幾種臨床常用的提純藥物相近或?yàn)楦?,因此是很有前途的藥物,有必要進(jìn)一步研究,為此近年來對“瑞香狼毒、土茯苓”組進(jìn)行了單藥分篩,從而獲取“瑞香狼毒”這一抗癌新藥,其在動物實(shí)驗(yàn)及臨床治療中都具有顯著的抗癌功效。
無效藥物26組,為中醫(yī)臨床之復(fù)方用藥提供了依據(jù)或參考,其中“瓜蔞、苦參”尚有進(jìn)一步研究的價(jià)值。
(二)中藥小復(fù)方便于分篩
對于抗癌中藥的篩選,以往一直是以篩選單味藥為主,且已有很多報(bào)道。但頗少進(jìn)行大批鼉的復(fù)方中藥的篩選,原因可能是復(fù)方中藥的藥味多,不易確定起主要療效的藥物及其有效成分,且更難于提取及合成。對此,我們認(rèn)為既然中醫(yī)以復(fù)方用藥為主,那么對復(fù)方中藥進(jìn)行研究,多一種篩選途徑還是很有裨益的,特別是二三味藥物組成的小復(fù)方,雖然不盡符合中醫(yī)的配伍給藥和常用劑型,但它比單味藥的篩選則更靠近中醫(yī)用藥的經(jīng)驗(yàn),而且機(jī)動靈活,對于有效的復(fù)方也便于單藥分篩而進(jìn)行分析,因此我們希望能有更多的同道進(jìn)行復(fù)方抗癌中藥的篩選研究,以便進(jìn)一步發(fā)掘祖國醫(yī)藥學(xué)寶庫。
(三)對抗癌藥物配伍的驗(yàn)證
中醫(yī)歷來主張復(fù)方用藥的,但速只是根據(jù)試驗(yàn),多未經(jīng)過動物實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證,在本實(shí)驗(yàn)中,我們對幾組抗癌有效的藥物,做了單味與復(fù)力藥效的對比,結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者的效應(yīng)并不一致,這就為中醫(yī)的復(fù)方用藥提供了某些實(shí)驗(yàn)證據(jù),如瑞香狼毒單用有顯著的抗癌作用.對小鼠肝癌之抑瘤率為42.5%,但其與薏米合用則失去抑瘤的功效。瓜蔞、訶子于分別單用時(shí),皆有抑瘤作用,而兩藥合用則反無抑瘤作用。黃連、黃柏對艾氏腹水癌的生命延長率為30.0-47.2%,但再加人參皂甙也即失去抗癌的功效。這說明復(fù)方中藥不等于單藥的加減,很可能有新的物質(zhì)形成,而發(fā)生增效、減效甚致無效。的臨床選用抗癌中藥時(shí),應(yīng)特別注意配伍問題。
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