一般而言,長期毒性試驗(yàn)至少需設(shè)高、中、低三個(gè)劑量給藥組和一個(gè)溶媒(或輔料)對(duì)照組.必要時(shí)還須設(shè)立空白對(duì)照組或陽性對(duì)照組。因?yàn)槔碚撋先后w中毒性反應(yīng)的發(fā)生率隨暴露量的增加而增加,所以高劑量原則上應(yīng)使動(dòng)物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng),甚至出現(xiàn)個(gè)別動(dòng)物死亡現(xiàn)象, 但死亡數(shù)不得超過20%以上;為考察毒性反應(yīng)劑量一反應(yīng)關(guān)系,應(yīng)在高劑量和低劑量之間設(shè)立中劑量。中劑量組應(yīng)相當(dāng)于藥效學(xué)試驗(yàn)的高劑量,應(yīng)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生輕微或中等程度的毒性反應(yīng);低劑量組原則上應(yīng)高于整體動(dòng)物最佳藥效學(xué)試驗(yàn)的有效劑量,并不使動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng);空白對(duì)照組應(yīng)給予溶媒或其他賦形劑;正常對(duì)照組應(yīng)口服等容量蒸館水,注射給藥時(shí)則應(yīng)注射等容量生理鹽水。
長期毒性試驗(yàn)的給藥周期取決于臨床用藥時(shí)間的長短,這是國際上普遍推行的原則,各國或國際藥政管理組織在執(zhí)行時(shí)有所不同(見表 4-5-9)。對(duì)于西藥來講,總的原則是臨床給藥期的3～4倍。中國中藥毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則是規(guī)定2倍以上,最長不超過半年(見表4-5-10);對(duì)于生物制品的試驗(yàn)周期,不僅要參考臨床療程,還要考慮反復(fù)給藥產(chǎn)生抗體的時(shí)間,一旦產(chǎn)生抗體則應(yīng)停止給藥。
長期毒理學(xué)試驗(yàn)研究中,劑量設(shè)計(jì)有多種,主要有半數(shù)致死量法、藥物代謝動(dòng)力學(xué)法、最大耐受量法、擬用臨床劑量法、等效劑量法等。
1.半數(shù)致死量法 (LD50 法 )
即根據(jù)藥物急性毒理學(xué)試驗(yàn)測定的LD50值決定三個(gè)組的劑量。如果急性毒理與長期毒理試驗(yàn)使用的是同一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,那么對(duì)大鼠而言,高、中、低三個(gè)劑量組可使用1/10、1/50、l/lOO的LD50 值;對(duì)犬而言,高、中、低三個(gè)劑量組可使用1/20、1/25、1/50的LD50值。如果急性毒理與長期毒理試驗(yàn)使用的是不同種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,若測定LD50為小鼠,那么在劑量設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)考慮種屬的差異,并按照相關(guān)折算系數(shù)進(jìn)行校正。
2.藥代動(dòng)力學(xué)法 (MBS 法 )
即根據(jù)藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)的最大有效安全濃度(MCD)結(jié)果,確定長期毒理學(xué)試驗(yàn)中的高、中、低三個(gè)劑量組。對(duì)大鼠而言,其高、中、低三個(gè)劑量組可分別使用 10～20MCD、3.3～6.6MCD、1.OMCD;對(duì)犬而言,其高、中、低三個(gè)劑量組可分別使用5～10MCD、1.65～3.3MCD、0.5MCD 。
若測定的MCD值為小鼠,那么在劑量設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)考慮種屬差異,并按照相關(guān)折算系數(shù)進(jìn)行校正。
3.最大耐受量法 (MTD 法 )
即根據(jù)大鼠急性毒性的最大無癥狀劑量試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計(jì)長期毒理試驗(yàn)的周期及劑量。對(duì)大鼠而言,高、中、低三個(gè)劑量組可分別使用0.5MTD、1/6MTD、1/20MTD作為試驗(yàn)劑量;對(duì)犬和猴而言,高、中、低三個(gè)劑量組可分別使用大鼠的0.5MTD、1/6MTD、1/2OMTD作為試驗(yàn)劑量。
4.擬用臨床劑量法 (ACD 法 )
即根據(jù)同類型藥物或國外資料的擬用臨床劑量作為試驗(yàn)劑量。如大鼠長期毒理學(xué)試驗(yàn)高、中、低三個(gè)劑量組可使用50～100倍、25～50倍、10～20倍的ACD作為試驗(yàn)劑量;犬長期毒理學(xué)試驗(yàn)高、中、低三個(gè)試驗(yàn)組可使用30～50倍、15～25倍、5～10倍的ACD作為試驗(yàn) 劑量。
5.等效劑量法
即根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人的等效劑量比值,再按照一定的比例倍數(shù)擴(kuò)大設(shè)計(jì)長期毒理學(xué)試驗(yàn)的高、中、低三個(gè)試驗(yàn)劑量。
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