前 言
本技術(shù)規(guī)范按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。
本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所和中山大學(xué)法醫(yī)鑒定中心共同提出。
本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定管理局歸口。
本技術(shù)規(guī)范起草單位： 司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所、中山大學(xué)法醫(yī)鑒定中心、 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院。
本技術(shù)規(guī)范主要起草人： 李成濤、孫宏鈺、趙書民、陸惠玲、李莉、侯一平。
本技術(shù)規(guī)范為首次發(fā)布。
引 言
本技術(shù)規(guī)范運(yùn)用法醫(yī)物證學(xué)、遺傳學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)，結(jié)合法醫(yī)物證鑒定的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)而制訂，為生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定提供科學(xué)依據(jù)和統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。
生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范
1 范圍
本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定的內(nèi)容及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。
本技術(shù)規(guī)范適用于在雙親皆無情形下甄別生物學(xué)全同胞與無關(guān)個(gè)體關(guān)系，若兩名被鑒定人間存在其他親緣關(guān)系（如半同胞、堂表親等），則本技術(shù)規(guī)范不適用。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GA/T382-2002 法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室規(guī)范
GA/T383-2002 法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范
SF/Z JD0105001-2010 司法鑒定技術(shù)規(guī)范—親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范
司發(fā)通[2007]71號 司法鑒定文書規(guī)范
3 術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1
全同胞 full sibling (FS)
具有相同的生物學(xué)父親和生物學(xué)母親的多個(gè)子代個(gè)體。
3.2
全同胞關(guān)系鑒定 full sibling testing
通過對人類遺傳標(biāo)記， 如常染色體STR基因座的檢測，根據(jù)遺傳規(guī)律分析，對有爭議的兩名個(gè)體間是否存在全同胞關(guān)系進(jìn)行鑒定，其參照關(guān)系為無關(guān)個(gè)體。
3.3
狀態(tài)一致性評分 Identity by state (IBS) score
兩名個(gè)體在同一基因座上可出現(xiàn)相同的等位基因，這些等位基因的“一致性” 即稱為狀態(tài)一致性。
該等位基因也稱為狀態(tài)一致性等位基因。相應(yīng)地，在1個(gè)STR基因座上，兩名被鑒定人間的狀態(tài)一致性等位基因個(gè)數(shù)稱之為IBS評分(IBS score, ibs)，若采用包含n個(gè)相互獨(dú)立的常染色體遺傳標(biāo)記分型系統(tǒng)對兩名被鑒定人進(jìn)行檢測，各個(gè)遺傳標(biāo)記上的ibs之和即為累計(jì)狀態(tài)一致性評分，記作IBS。
3.4
檢測系統(tǒng)效能 power of the genotyping system
采用給定的檢測系統(tǒng)以及相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定時(shí)，預(yù)計(jì)能夠給出明確結(jié)論的可能性。
4 相關(guān)參數(shù)的計(jì)算方法
4.1 單個(gè)常染色體 STR 基因座的狀態(tài)一致性評分（ ibs） 計(jì)算
依據(jù)狀態(tài)一致性評分的定義，設(shè)有A和B兩名被鑒定人，某一常染色體STR基因座有P、 Q、 R和S等多個(gè)等位基因，則A與B間在該遺傳標(biāo)記的狀態(tài)一致性評分可依據(jù)表1計(jì)算。
4.2 常染色體 STR 基因座分型系統(tǒng)累計(jì)狀態(tài)一致性評分（ IBS） 的計(jì)算
依據(jù)狀態(tài)一致性評分的定義，采用包含n個(gè)相互獨(dú)立的常染色體STR基因座分型系統(tǒng)對兩名被鑒定
人進(jìn)行檢測后，其累計(jì)狀態(tài)一致性評分按以下公式進(jìn)行計(jì)算：
IBS ——常染色體STR基因座分型系統(tǒng)累計(jì)狀態(tài)一致性評分
ibsi ——單個(gè)常染色體STR基因座的狀態(tài)一致性評分
5 檢驗(yàn)程序
5.1 采樣要求
采樣要求應(yīng)符合SF/ZJD0105001-2010的規(guī)定。
5.2 DNA 提取和保存
檢材的DNA提取和保存應(yīng)符合GA/T383-2002和SF/Z JD0105001-2010的規(guī)定。
5.3 DNA 定量分析
DNA定量分析應(yīng)按照GA/T382-2002和GA/T383-2002的要求進(jìn)行。
5.4 PCR 擴(kuò)增與分型
5.4.1 基因座
5.4.1.1 在進(jìn)行生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定時(shí)， 目前親緣關(guān)系鑒定常用的 19 個(gè)常染色體 STR 基因座（vWA、D21S11、 D18S51、 D5S818、 D7S820、D13S317、 D16S539、 FGA、 D8S1179、 D3S1358、CSF1PO、 TH01、 TPOX、Penta E、 Penta D、D2S1338、 D19S433、 D12S391、 D6S1043） 為必檢基因座。
5.4.1.2 鼓勵在上述 19 個(gè)必檢 STR 基因座基礎(chǔ)上增加更多的、經(jīng)過驗(yàn)證的、與上述 19 個(gè) STR 基因座不存在連鎖的其它常染色體 STR 基因座，以提高檢測系統(tǒng)效能。不推薦在 19 個(gè) STR 必檢基因座的基礎(chǔ)上每次增加 1 個(gè)或 2 個(gè) STR 基因座，這對提高檢測系統(tǒng)效能的幫助有限。建議在 19 個(gè)必檢 STR 基因座基礎(chǔ)上，每次增加 10 個(gè)常染色體 STR 基因座，如檢測 29 個(gè)或 39 個(gè)，以下 22 個(gè)常染色體 STR 為部分可供選擇的補(bǔ)充基因座（排序不分先后）： D1S1656、 D2S441、 D3S1744、D3S3045、 D4S2366、 D5S2500、D6S477、 D7S1517、D7S3048、 D8S1132、 D10S1248、 D10S1435、 D10S2325、D11S2368、 D13S325、 D14S608、D15S659、 D17S1290、D18S535、 D19S253、 D21S2055、 D22-GATA198B05。
5.4.1.3 當(dāng)兩名被鑒定人均為男性時(shí)， 可以補(bǔ)充檢驗(yàn) Y-STR 基因座（如 DYS456、 DYS389I、DYS390、DYS389II、 DYS458、 DYS19、 DYS385 a/b、DYS393、 DYS391、 DYS439、 DYS635、 DYS392、 YGATA H4、 DYS437、DYS438、 DYS448 等）； 當(dāng)兩名被鑒定人均為女性時(shí)， 可以補(bǔ)充檢驗(yàn) X-STR 基因座（如 GATA172D05、 HPRTB、DXS6789、 DXS6795、 DXS6803、DXS6809、 DXS7132、 DXS7133、 DXS7423、 DXS8377、DXS8378、 DXS9895、DXS9898、 DXS10101、 DXS10134、DXS10135、 DXS10074 等）。
5.4.1.4 可以通過線粒體 DNA 序列分析進(jìn)行補(bǔ)充檢驗(yàn)。補(bǔ)充檢驗(yàn)不能單獨(dú)使用。
5.4.2 PCR 擴(kuò)增
宜選用商品化的試劑盒進(jìn)行DNA擴(kuò)增，在常染色體STR基因座分型中，至少應(yīng)該包含本技術(shù)規(guī)范5.4.1中所規(guī)定的19個(gè)常用STR基因座的分型結(jié)果。每批檢驗(yàn)均應(yīng)有陽性對照樣本（已知濃度和基因型的對照品DNA和/或以前檢驗(yàn)過的、已知基因型的樣本）以及不含人基因組DNA的陰性對照樣本。 PCR擴(kuò)增體系與溫度循環(huán)參數(shù)均按試劑盒的操作說明書進(jìn)行。
5.4.3 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測與結(jié)果判讀
使用遺傳分析儀，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，使用等位基因分型參照物(Ladder)來對樣本分型，步驟方法按照儀器操作手冊。
5.4.4 結(jié)果分析
全同胞關(guān)系鑒定主要依據(jù)常染色體STR基因座分型結(jié)果，通過計(jì)算兩名被鑒定人間的累計(jì)狀態(tài)一致性評分（ IBS），結(jié)合IBS在無關(guān)個(gè)體對人群和全同胞對人群中的概率分布規(guī)律，對被鑒定人之間是否存在生物學(xué)全同胞關(guān)系做出判斷。依據(jù)孟德爾遺傳規(guī)律可知，即使是真正的全同胞，在同一個(gè)基因座上也可以出現(xiàn)基因型完全不同（即在該基因座上的狀態(tài)一致性評分為0）的情形，其發(fā)生概率為0.2500；另一方面，即使是真正的無關(guān)個(gè)體，也可以因?yàn)榕既坏囊蛩卦谕换蜃铣霈F(xiàn)基因型完全相同（即在該基因座上的狀態(tài)一致性評分為2）的情形，其發(fā)生概率與等位基因的人群頻率分布有關(guān)。
6 鑒定意見
6.1 依據(jù)常染色體 STR 基因座分型結(jié)果進(jìn)行生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定時(shí)，鑒定意見分為“ 傾向于認(rèn)為兩名被鑒定人為全同胞” 、“傾向于認(rèn)為兩名被鑒定人為無關(guān)個(gè)體” 和“ 在當(dāng)前檢測系統(tǒng)下，無法給出傾向性意見”3 種。
6.2 鑒定意見的準(zhǔn)確性受 IBS 值和檢測系統(tǒng)效能的影響。表 2 列出了采用不同的常染色體 STR 基因座檢測系統(tǒng)進(jìn)行生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定的 IBS 域值和檢測系統(tǒng)效能。由表 2 可見，僅僅依據(jù) 19 個(gè)常染色體基因座的分型結(jié)果，有相當(dāng)一部分案例（約占 25%）在不補(bǔ)充檢驗(yàn)其它檢測系統(tǒng)的情形下將無法得出結(jié)論。
7 鑒定文書
生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定文書的格式要求參照《司法鑒定文書規(guī)范》 。
8 特別說明
8.1 本實(shí)施規(guī)范定義的生物學(xué)全同胞關(guān)系特指在雙親皆無情形下甄別全同胞和無關(guān)個(gè)體兩種檢驗(yàn)假設(shè)。鑒定人應(yīng)詳細(xì)了解兩名被鑒定人間是否存在其它可能的親緣關(guān)系，若兩名被鑒定人間存在其他親緣關(guān)系（如半同胞、堂表親等），則本實(shí)施規(guī)范不適用。
8.2 依據(jù) 19 個(gè)常染色體 STR 基因座的分型結(jié)果進(jìn)行全同胞關(guān)系鑒定時(shí)，該檢測系統(tǒng)的效能約為0.7500，即采用該系統(tǒng)同時(shí)依據(jù)相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)能夠得出明確結(jié)論的可能性約為75.00%，得出的傾向性鑒定意見的準(zhǔn)確性不低于 99.00%；分別依據(jù) 29 個(gè)常染色體 STR 基因座和39 個(gè)常染色體 STR 基因座的分型結(jié)果同時(shí)依據(jù)相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全同胞關(guān)系鑒定時(shí)，檢測系統(tǒng)的效能分別約為 0.8500 和0.9500，得出的傾向性鑒定意見的準(zhǔn)確性均不低于 99.90%。
8.3 表 2 所給出不同的常染色體STR 基因座檢測系統(tǒng)下進(jìn)行生物學(xué)全同胞鑒定的 IBS 域值和檢測系統(tǒng)效能，所依賴的基因座來源于 5.4.1，相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)僅適用于檢測 19 個(gè)、 29 個(gè)和 39 個(gè)常染色體 STR基因座。在 19 個(gè)必檢 STR 基因座基礎(chǔ)上，每次補(bǔ)充檢驗(yàn) 10 個(gè)常染色體 STR 基因座時(shí)，推薦的補(bǔ)充順序?yàn)?，將適合的候選常染色體 STR 基因座依據(jù)其在該人群中的個(gè)體識別力由大到小進(jìn)行排序和選擇，但最小的個(gè)體識別力應(yīng)不低于 0.9000。
8.4 對于補(bǔ)充檢驗(yàn)的 X 染色體遺傳標(biāo)記、 Y 染色體遺傳標(biāo)記或線粒體 DNA 測序結(jié)果，應(yīng)采用文字描述的方式進(jìn)行分析。
