品系背景：C57BL/6N
品系構(gòu)建策略：
在小鼠PD-1基因位點敲入人源PD-1胞外域序列，保留小鼠跨膜域和胞內(nèi)域，構(gòu)建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。
品系說明：
hPD-1在小鼠體內(nèi)具有正常的生理表達和調(diào)節(jié)模式。
PD-1胞外域人源化，利于hPD-1靶向藥物的識別。
保留小鼠PD-1胞內(nèi)域，保證正常的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。
小鼠靶基因不表達，避免交叉反應(yīng)。
小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。
研究應(yīng)用：
本模型可用于評估hPD-1靶向藥物在免疫健全小鼠體內(nèi)的有效性及安全性：
與人源化腫瘤細胞系聯(lián)用
例如：與MC38-hPD-L1腫瘤細胞系聯(lián)用，構(gòu)建同源腫瘤模型，以測試靶向hPD-1和hPD-L1的聯(lián)合療法的療效。
與其他免疫檢查點人源化小鼠雜交
例如：與hVISTA小鼠雜交，在得到的雙人源化的hPD-1/hVISTA小鼠模型中評估靶向hPD-1和/或hVISTA的兩種藥物。
模型驗證：
PD-1表達檢測
圖1. hPD-1在hPD-1小鼠中的表達模式與mPD-1在野生型小鼠中的表達模式一致。
hPD-1和mPD-1在經(jīng)αCD3/αCD28抗體活化的hPD-1小鼠和野生型小鼠脾細胞中的表達情況：（A）Treg亞群、CD4+亞群（CD3+CD4+Foxp3-）和（B）CD8+ T（CD3+CD8+）亞群。
圖2. hPD-1在hPD-1小鼠的腫瘤浸潤淋巴細胞中的表達。
從接種了MC38腫瘤細胞30天的野生型小鼠和hPD-1小鼠中分離腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）。hPD-1小鼠在CD4+ T細胞和CD8+ T細胞上表達hPD-1蛋白，野生型小鼠在CD4+ T細胞和CD8+ T細胞上表達mPD-1蛋白。
PD-1功能檢測
圖3. T細胞活化（IL-2的產(chǎn)生和擴增）在野生型小鼠和PD-1人源化小鼠之間沒有差別。
A. 采用ELISA法測定野生型小鼠和PD-1人源化小鼠αCD3/αCD28活化脾細胞的上清液中IL-2的產(chǎn)生情況，兩者沒有差別。
B. αCD3激活的脾細胞和淋巴結(jié)（LN）中的 CD4+T細胞亞群（CD4+CD25-），CFSE標記顯示在兩種小鼠之間的活化CD4+T細胞亞群的數(shù)量沒有明顯差別。
體內(nèi)藥效實驗
圖4. 人源化PD-1小鼠體內(nèi)觀察到hPD-1單抗的抗腫瘤活性。
A）hPD-1小鼠接種MC38小鼠結(jié)直腸癌細胞28天后，分別用A、B、C三種αhPD-1單抗以及同型對照處理后的腫瘤體積。（B）野生型和hPD-1小鼠顱內(nèi)接種GL261小鼠膠質(zhì)瘤細胞后，用αhPD-1抗體或αmPD-1抗體處理。αhPD-1抗體處理能夠顯著提高hPD-1小鼠的生存率。
