1、生物技術(shù)：指以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其它基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類提供商品和服務(wù)的一個(gè)綜合技術(shù)體系。
2、基因工程：利用DNA體外重組或PCR擴(kuò)增技術(shù)從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經(jīng)過一系列切割，加工修飾，連接反應(yīng)形成重組DNA分子，再將其轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞，以期獲得基因表達(dá)的過程。
3、蛋白質(zhì)工程：在基因工程技術(shù)對編碼蛋白質(zhì)的基因了解的基礎(chǔ)上，對蛋白質(zhì)的氨基酸序列、結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行分析，進(jìn)而通過對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、氨基酸序列和翻譯后的修飾等手段改變甚至創(chuàng)造出新的和更有效的蛋白質(zhì)。
4、限制性核酸內(nèi)切酶(restriction endonuclease)：識別DNA的特異序列, 并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。
5、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用transduction：通過病毒介導(dǎo)發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組。
6、基因文庫的構(gòu)建：用限制性內(nèi)切酶對DNA酶解，然后把酶解的片段克隆進(jìn)載體，再對重組克隆進(jìn)行鑒定、分離、再培養(yǎng)和進(jìn)一步鑒定，整個(gè)過程稱為基因文庫的構(gòu)建。
7、分子雜交：不同來源的核酸經(jīng)變性和復(fù)性的過程，其中一些不同的核苷酸單鏈由于存在局部堿基互補(bǔ)片段，而在復(fù)性時(shí)形成雜化雙鏈（heteroduplex），此過程稱分子雜交。
8、基因表達(dá)：細(xì)胞在生命過程中，把蘊(yùn)藏在DNA中的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成為具有功能的蛋白質(zhì)分子的過程稱為基因表達(dá) (gene expression) 。
9、融合蛋白：外源蛋白在異源宿主細(xì)胞中含量通常很低，因此其會被宿主細(xì)胞降解。將要表達(dá)的外源蛋白與一個(gè)宿主的蛋白共價(jià)結(jié)合形成融合蛋白。
10、非融合蛋白：指所表達(dá)的外源蛋白的N端或C端不含任何其他氨基酸，因此要求翻譯起始氨基酸位點(diǎn)ATG必須位于要表達(dá)的外源基因片段的5’端，終止密碼子必須位于要表達(dá)的外源基因片段的3’端。
11、外源蛋白質(zhì)的復(fù)性：指變性的包含體蛋白在適當(dāng)?shù)臈l件下折疊成有活性的蛋白質(zhì)的過程。包括表達(dá)蛋白中二硫鍵的正確形成和正確空間構(gòu)象的形成。
12、寡核苷酸介導(dǎo)的誘變（定點(diǎn)誘變）：在DNA水平上改變氨基酸的編碼序列，若蛋白的三級結(jié)構(gòu)已經(jīng)由X射線晶體衍射或其他方法測定，則較容易判定應(yīng)改變哪個(gè)氨基酸以獲得預(yù)期的性狀。
13、現(xiàn)代發(fā)酵工程的主體是利用微生物，特別是經(jīng)DNA重組技術(shù)改造過的微生物來生產(chǎn)商業(yè)產(chǎn)品,或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程中的一種新技術(shù)。
14、罐批發(fā)酵：在滅菌的培養(yǎng)基上接種相應(yīng)的微生物，然后不再加入新的培養(yǎng)基。
15、補(bǔ)料分批發(fā)酵：發(fā)酵過程中在不同時(shí)期加入越來越多的營養(yǎng)物，但不除去舊的培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基的量逐漸增大，可以延長對數(shù)期與靜止期的持續(xù)時(shí)間，增加生物量的積累，也能增加靜止期的細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累。
16、連續(xù)發(fā)酵：在發(fā)酵過程中不斷加入新鮮的培養(yǎng)基，同時(shí)除去等體積的舊的含懸浮的微生物的培養(yǎng)基。
17、浮集法收集：利用高壓或電解可以產(chǎn)生大量的微小氣泡，當(dāng)有長鏈脂肪酸或胺存在時(shí)，氣泡可以穩(wěn)定存在相當(dāng)長的時(shí)間。在適當(dāng)條件下，細(xì)胞就可以被這些氣泡所吸附而停留在泡沫層中。只收集泡沫層，改變條件去掉氣泡，就可以得到需要的微生物細(xì)胞。
18、生物農(nóng)藥：指由生物體產(chǎn)生的具有防治病、蟲害和除雜草等功能的一大類物質(zhì)的總稱。它們大多數(shù)是生物體的代謝產(chǎn)物，包括微生物殺蟲劑、農(nóng)用抗生素制劑和微生物除草劑等。
19、抗生素：指由生物（包括微生物、植物和動物）在其生命活動過程中所產(chǎn)生的活性物質(zhì)，這類物質(zhì)能以極小的濃度選擇性地抑制或殺滅其他微生物或腫瘤細(xì)胞、抑制酶的活性、殺蟲或刺激作物生長。
20、生物除草劑：是指使用雜草的天敵或雜草的致病物質(zhì)來防治雜草，使雜草的密度降低到經(jīng)濟(jì)上能夠容許的水平，但并非是根除雜草。
21、細(xì)菌素：指一種細(xì)菌的某些株系所產(chǎn)生的對該種細(xì)菌的另一些菌株或關(guān)系較近的其他細(xì)菌有殺傷作用、非復(fù)制性的含蛋白質(zhì)的抗菌物質(zhì)。
22、生物凈化：利用生物來除去環(huán)境中的生物垃圾和有毒物質(zhì)的過程。
23、微生物蛋白：又稱單細(xì)胞蛋白（SCP） ，是從純培養(yǎng)的微生物細(xì)胞中提取的總蛋白，可以作為人或動物蛋白的補(bǔ)充。
24、復(fù)合穿梭載體：即把不同生物來源、控制各種有用特性的遺傳元件集中在一起構(gòu)建穿梭載體，使之可以在特定細(xì)胞的特定條件下工作。
25、血影細(xì)胞：指哺乳動物的紅細(xì)胞在機(jī)械作用、病毒誘導(dǎo)、低滲等條件下發(fā)生溶血，使血紅蛋白大量溢出，僅剩下細(xì)胞膜包被的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。
26、基因槍法：通過高壓氣體等動力，高速發(fā)射包裹有重組DNA的金屬顆粒，將目的基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，整合到染色體上，并從這些細(xì)胞再生出完整的植株。
27、轉(zhuǎn)基因動物：用實(shí)驗(yàn)導(dǎo)入的方法使外源基因在染色體基因組內(nèi)穩(wěn)定整合，并能遺傳給后代的一類動物。
28、基因敲除：利用基因定向插入某一內(nèi)源基因而破壞其功能的方法，來研究某一特定基因在發(fā)育過程中的功能。
29、抗體：淋巴細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異蛋白，在其他免疫蛋白的幫助下與外來物質(zhì)結(jié)合，抵消其生物學(xué)功能，保護(hù)自己不受有毒物質(zhì)和病原菌的侵害。
30、抗原決定簇：對于一個(gè)免疫刺激，每一個(gè)淋巴細(xì)胞都會合成并分泌一種單個(gè)的抗體，這些抗體可以高度特異地識別免疫抗原的特定區(qū)域，也就是抗原決定簇。
31、單克隆抗體：通過B細(xì)胞雜交瘤技術(shù), 獲得特異性針對某一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆，產(chǎn)生均一性的抗體。
32、抗體融合蛋白：抗體的一部分被非抗體序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性。
33、現(xiàn)代分子診斷技術(shù)：利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)方法，直接探測基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平，從而對疾病作出診斷的方法。
34、疫苗：利用微生物及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過人工減毒或滅活或基因工程等方法制成，用于預(yù)防疾病的自動免疫制劑。
35、基因工程疫苗：利用現(xiàn)代基因工程技術(shù)將有效的特異性抗原基因插入易于增殖的載體，在載體增殖時(shí)可表達(dá)有效特異性抗原，取之作為疫苗。如基因工程乙肝疫苗。
36、亞基疫苗：單純的外殼結(jié)合蛋白即可以在受體內(nèi)激發(fā)成足夠多的抗體，因此可以利用病原物的某一部分制得的疫苗。
37、DNA免疫：又稱基因免疫，系指將靶抗原編碼基因置于真核表達(dá)調(diào)控元件的調(diào)控下，將該質(zhì)粒DNA直接進(jìn)行動物體內(nèi)接種，并以與自然感染類似的方式呈遞抗原，誘生特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答的新理論和技術(shù)。
38、基因芯片（DNA微陣列）：通過微陣列(Microarray)技術(shù)將高密度DNA片段陣列通過高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面，以熒光標(biāo)記的DNA探針，借助堿基互補(bǔ)雜交原理，進(jìn)行大量的基因表達(dá)及監(jiān)測等方面研究。
1、以PBR322為例，說明如何篩選陽性重組子？
BamHI片段(Tcr)
PBR322
PstI(Apr)片段 重組分子I
PstI片段 重組分子Ⅱ(Aps Tcr) (Apr Tcs）
外源DNA
BamHI片段
重組分子Ⅰ 分別轉(zhuǎn)化E.coli 涂布Ap平板 Apr轉(zhuǎn)化子
重組分子Ⅱ (ApS TcS) 涂布Tc平板 Tcr轉(zhuǎn)化子
影印到Tc平板上 Apr TcS為重組子 Apr Tcr為原載體
影印到Ap平板上 ApS Tcr為重組子 即為非重組子
2、作為理想載體，質(zhì)粒需具備那些條件？
（1）具有松弛型復(fù)制子；
（2）在復(fù)制子外存在多克隆位點(diǎn)；
（3）具有插入失活的篩選標(biāo)記；
（4）分子量較小，拷貝數(shù)較高。
3、限制性內(nèi)切酶識別順序和酶切位點(diǎn)
（1）識別４-8個(gè)相連的核苷酸；
（2）富含GC；
（3）對稱性------雙對稱；
（4）切點(diǎn)大多數(shù)在識別順序之內(nèi)，也有例外；
（5）限制酶切后產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是５’-P和３’-OＨ。
4、敘述用大腸桿菌質(zhì)粒pBR316篩選啟動子的過程。
使用tetr作報(bào)告基因分離功能啟動子
（1）首先在大腸桿菌質(zhì)粒pBR316（含有一個(gè)tet基因、Hind Ⅲ位點(diǎn)）上的tet的啟動子序列中插入一個(gè)EcoR1的酶切位點(diǎn)（ pBRH3B, pBRH1 ），使之失活。
（2）將純化的細(xì)菌染色體DNA片斷，克隆在pBRH3B或 pBRH1 的EcoR1限制性位點(diǎn)上；轉(zhuǎn)化給對tet敏感的大腸桿菌寄主細(xì)胞。
5、若克隆的基因有罕見密碼子，如何提高蛋白表達(dá)量。
（1）如果罕見密碼子在目的基因中出現(xiàn)頻率低：利用密碼子的簡并性，對外源基因進(jìn)行定點(diǎn)突變，將罕見密碼子突變?yōu)樗拗鞒Ｓ玫拿艽a子，但不改變基因所編碼的氨基酸序列。
（2）若目的基因中的罕見密碼子含量較高：通過基因工程的方法，將編碼識別罕見密碼子的tRNA的基因轉(zhuǎn)入細(xì)菌細(xì)胞中，從而使轉(zhuǎn)化后的細(xì)菌能夠大量地轉(zhuǎn)錄可識別罕見密碼子的tRNA。
6、敘述雙質(zhì)粒系統(tǒng)作用原理。
（1）用trp啟動子帶動編碼cI阻遏蛋白的基因,并將它們置于一個(gè)低拷貝的質(zhì)粒上；
（2）將要表達(dá)的基因置于PL啟動子的下游,使其表達(dá)受PL啟動子的調(diào)控。
（3）把這兩個(gè)質(zhì)粒同時(shí)轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，當(dāng)培養(yǎng)基中沒有色氨酸時(shí)， trp啟動子啟動，合成cI蛋白，PL帶動的外源基因則不表達(dá)；
（4）如果向培養(yǎng)基中加入色氨酸， trp啟動子則關(guān)閉，沒有cI蛋白合成， PL啟動子帶動的外源基因就可以表達(dá)了。
7、敘述一種基因誘變的方法。
重疊延伸誘變:
合成4個(gè)引物，包括兩個(gè)含有突變堿基的突變引物，這兩個(gè)引物反向部分重疊；另兩個(gè)引物分別和目的基因的兩端互補(bǔ)（通用引物）；
引物兩兩配對，分兩管進(jìn)行第一次PCR，產(chǎn)生兩個(gè)部分重疊的DNA片段；
將上述兩管PCR產(chǎn)物混合，變性再復(fù)性，含有重疊部分的DNA 片段可以配對，然后在DNA聚合酶的作用下延伸產(chǎn)生完整的雙鏈DNA（延伸的4個(gè)組合中只有一種可以產(chǎn)生可延伸的3’-OH ）。
除去多余引物，用一對通用引物，以新合成的完整雙鏈DNA為模板進(jìn)行第二次PCR，可得到含有預(yù)期突變位點(diǎn)的DNA片段。
8、簡述重組蛋白藥物生產(chǎn)的主要步驟?
提取蛋白質(zhì)→純化→測氨基酸序列→推導(dǎo)DNA序列→人工合成DNA序列的探針→從文庫中篩選cDNA基因→克隆入表達(dá)載體→高效表達(dá)→分離純化產(chǎn)物
9、敘述現(xiàn)代發(fā)酵工程流程?
菌種的選育→培養(yǎng)基的配制→滅菌→擴(kuò)大培養(yǎng)和接種→發(fā)酵過程→分離提純
14、DNA疫苗的優(yōu)越性
1）DNA比蛋白質(zhì)穩(wěn)定，可以保存較長的時(shí)間；
2）DNA的提取和純化也比蛋白質(zhì)容易，適合大規(guī)模生產(chǎn)；
3）DNA片段可以插入質(zhì)粒中制成疫苗，而且在一個(gè)質(zhì)粒上可以同時(shí)容納多個(gè)抗原基因。因此可以一次注射就獲得多種免疫能力；
4）DNA疫苗對于一些目前難以用常規(guī)疫苗防治的疾病的預(yù)防和治療有重要意義。
10、簡述限制性內(nèi)切酶PstⅠ的生產(chǎn)流程?
PBR322 HindⅢ酶解 P.stuartio的核DNA
重組
噬菌體 侵染
轉(zhuǎn)化大腸桿菌
產(chǎn)生抗性
對噬菌體有裂解作用的轉(zhuǎn)化子 有限制性內(nèi)切酶基因，培養(yǎng)
PstI內(nèi)切酶活性檢測
檢測PstI甲基化酶活性
11、如何在串聯(lián)的氣升式反應(yīng)器中完成T4連接酶的大規(guī)模生產(chǎn)。
把大腸桿菌菌株NM989放在兩個(gè)生物反應(yīng)器中分別生長和進(jìn)行誘導(dǎo)，細(xì)胞懸液從生長階段到誘導(dǎo)階段的流動通過管子相連，由泵控制：
§ 生長階段：30℃，外管氣升式反應(yīng)器體積為10L，此階段連接酶基因不表達(dá)；
§ 誘導(dǎo)階段：42℃，反應(yīng)器體積為5L，此階段可以特定速率取出細(xì)胞用于下游純化。
12、如何改造蘇云金桿菌菌株，使其在營養(yǎng)生長階段表達(dá)毒素蛋白？其依據(jù)為何？
蘇云金桿菌只在孢子形成階段才合成蘇云金桿菌前毒素蛋白。若將該基因在營養(yǎng)生長時(shí)期就轉(zhuǎn)錄和翻譯，就可以通過連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)毒素，降低生產(chǎn)成本。
蘇云金桿菌的孢子形成過程中，有一個(gè)特定的轉(zhuǎn)錄因子（σ因子），可以與此時(shí)期活躍的基因的啟動子相互作用，啟動它們的轉(zhuǎn)錄。
蘇云金桿菌的毒素基因的啟動子就是在這一轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控下，只在孢子形成時(shí)轉(zhuǎn)錄；如果用一個(gè)營養(yǎng)時(shí)期活躍的啟動子帶動基因表達(dá)，則蘇云金桿菌的毒素基因就可以在營養(yǎng)生長階段表達(dá)。
13、如何分離固氮相關(guān)基因？
遺傳互補(bǔ)法。從野生型固氮基因文庫中堅(jiān)定分析能使各種突變體恢復(fù)固氮能力的克隆。分別將光譜宿主克隆載體和固氮菌株的總DNA用限制性內(nèi)切酶酶解，將酶解后的兩者連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，篩選構(gòu)建野生型微生物的基因文庫A，同時(shí)用誘變劑處理微生物細(xì)胞，篩選出無氮不生長的突變型微生物B，將AB接合，在不含氮的培養(yǎng)基上，篩選、提取生長的菌落的DNA即可得到。
15、如何獲得結(jié)瘤作用基因？
遺傳互補(bǔ)法，即用野生型苜蓿中華根瘤菌的基因文庫轉(zhuǎn)化不能結(jié)瘤的苜蓿中華根瘤菌突變體（nod-），然后篩選出可形成根瘤的重組根瘤菌：
（1）建立野生型苜蓿中華根瘤菌的基因文庫
（2）基因文庫包裝入λ噬菌體并引入大腸桿菌，經(jīng)結(jié)合作用進(jìn)入苜蓿中華根瘤菌突變株（nod-），載體上的四環(huán)素抗性基因可作為選擇標(biāo)記
（3）培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后的苜蓿中華根瘤菌并檢驗(yàn)它們在根上形成根瘤的能力
（4）從能形成根瘤的苜蓿植株的根瘤中分離苜蓿中華根瘤菌，找到載體上的插入片段，進(jìn)行亞克隆和進(jìn)一步分析
（5）以分離到的結(jié)瘤基因?yàn)樘结槪诨蛭膸熘泻Y選與其相鄰的DNA片段，來獲得更多基因。
16、如何分離纖維素酶？
原核：1.從原核生物中克隆編碼葡聚糖內(nèi)切酶基因：
（1） 構(gòu)建能分解纖維素的原核生物的核基因文庫，在含有抗性選擇性平板上培養(yǎng)宿主菌
（2） 菌落在含羧甲基纖維素的平板上37°培養(yǎng)，能夠產(chǎn)生并分泌葡聚糖內(nèi)切酶的菌落周圍的羧甲基纖維素會被部分分解
（3） 水解區(qū)域可通過剛果紅染色觀察，呈紅色
2.分離葡聚糖外切酶基因：采用免疫學(xué)方法篩選帶有重組的葡聚糖外切酶基因的克隆
3.分離β-葡糖苷酶基因：構(gòu)建能產(chǎn)生β-葡糖苷酶的微生物的核基因文庫
17、酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？
（1）對其遺傳學(xué)和生理學(xué)的研究較為深入，已獲得全部基因組序列；
（2）酵母在小量和大規(guī)模的生物反應(yīng)器中都能快速生長
（3）有幾個(gè)很強(qiáng)的酵母基因啟動子，其中酵母細(xì)胞內(nèi)2μm質(zhì)?？勺鳛閮?nèi)源表達(dá)載體；
（4）可以對蛋白進(jìn)行多種翻譯后修飾
（5）自然分泌蛋白少，純化較方便
（6）具有較高的安全性（7）與高等真核生物非常相像。
18、獲得轉(zhuǎn)基因哺乳動物細(xì)胞的方法有哪些？
（1）借助于載體的基因轉(zhuǎn)移：適用于哺乳動物細(xì)胞的載體，直接或與野生型病毒一起轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。
（2）顯微注射法：把目的基因用顯微注射的方法直接注入目的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核。
（3）磷酸鈣介導(dǎo)的DNA導(dǎo)入：DNA與磷酸鈣共沉淀后，DNA被包裹在磷酸鈣晶體顆粒中，這種微型磷酸鈣晶體可使目的細(xì)胞產(chǎn)生吞噬泡，并使吞噬泡的膜局部溶解，DNA由此進(jìn)入細(xì)胞。
（4）電擊法：將目的細(xì)胞與外源DNA共培養(yǎng)，向培養(yǎng)液施加一個(gè)瞬時(shí)高電壓，使得目的細(xì)胞的細(xì)胞膜暫時(shí)出現(xiàn)孔洞，外源DNA即由此孔洞進(jìn)入細(xì)胞。
（5）脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移：將外源DNA包裹在脂質(zhì)體中，一起轉(zhuǎn)入細(xì)胞。
（6）染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移：用離心分離法或流式細(xì)胞儀分離法將染色體分離出來之后，以其為媒介將外源基因?qū)肽康募?xì)胞。
（7）血影細(xì)胞介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移：先將外源DNA轉(zhuǎn)入血影細(xì)胞，然后讓血影細(xì)胞與受體細(xì)胞在適當(dāng)條件下發(fā)生細(xì)胞融合，從而將外源DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。
19、酶聯(lián)免疫吸附測定法基本原理
基本原理：測量時(shí)，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，再加一抗與之相結(jié)合，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。
20、簡述將DNA轉(zhuǎn)入鼠的基因組的3種方法。
（1）反轉(zhuǎn)錄病毒法：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將外源基因轉(zhuǎn)入胚胎早期細(xì)胞，然后移植到受體動物中。
（2）DNA微粒注射法：利用微注射法將DNA直接注射入受精卵的精前核中。
①向供體雌鼠注射懷孕母馬的血清，48小時(shí)后再注射人的絨毛膜促性腺激素，使其超量排卵，增加用于微注射接種DNA的受精卵數(shù)量；
②雌鼠交配后取出受精卵，將外源基因注射進(jìn)受精卵中；
③將注射后的受精卵用顯微外科手術(shù)移植到假孕雌鼠的子宮內(nèi)，大約3周后，接受過注射的受精卵發(fā)育生長為幼鼠，由代孕母鼠產(chǎn)下。
（3）胚胎干細(xì)胞法：將基因工程改造過的胚胎干細(xì)胞導(dǎo)入早期胚胎。
21、簡述單克隆抗體制備過程。
（1）將抗原注射給實(shí)驗(yàn)鼠后取出B淋巴細(xì)胞；
（2）B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合、篩選出雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)；
（3）篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞群，進(jìn)行老鼠體內(nèi)培養(yǎng)，再從其腹水中提取，所得即為單克隆抗體。
22、如何在重組噬菌體中生產(chǎn)抗體，同時(shí)使蛋白表達(dá)為附著型或分泌型兩種？
從分離的淋巴細(xì)胞中提取mRNA 在絲狀噬菌體的外殼蛋白Ⅲ基因和外源抗體蛋白基因之間插入一個(gè)琥珀突變密碼子UAG
mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 絲狀噬菌體
感染
通過PCR擴(kuò)增重鏈和輕鏈 突變的菌株 非突變的菌株
用一套特別的限制性內(nèi)切酶酶解 突變密碼子UAG 突變密碼子UAG
讀為 讀為
將重鏈序列克隆到 將輕鏈序列克隆到 谷氨酸Glu 終止密碼子
重鏈絲狀噬菌體載體中 輕鏈絲狀噬菌體載體中
將重鏈和輕鏈重組到一個(gè)絲狀噬菌體載體中 融合蛋白 分泌型蛋白
用抗原結(jié)合篩選噬菌斑
23、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移的一般過程：
1）目的基因克隆到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上；
2）帶有目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體通過物理方法如電穿孔法導(dǎo)入已選定的包裝細(xì)胞；
3）根據(jù)載體所提供的篩選標(biāo)記基因篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞；
4）選擇具有高滴度重組病毒的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，分離重組病毒；
5）重組病毒感染靶細(xì)胞，采用兩種方式，一種是以無細(xì)胞帶病毒上清和靶細(xì)胞一起溫育；另一種以產(chǎn)病毒包裝細(xì)胞經(jīng)射線照射致死后作為飼養(yǎng)細(xì)胞，被靶細(xì)胞在其上培養(yǎng)達(dá)到目的。
6）如采用體外感染，則將感染的細(xì)胞回輸體內(nèi)，分析治療基因的表達(dá)及治療效果；
7）病毒感染的質(zhì)量控制，在基因轉(zhuǎn)移過程中要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。
