滇重樓[1][Paris polyphylla smith var.yunnanensis（Franch.） Hand.-Mazz]的根狀莖是云南白藥系列的主要原料。然而，滇重樓根莖繁殖率低，離體培養(yǎng)難度大，因此，利用種子繁殖仍然是滇重樓育苗的主要途徑。滇重樓由于自身特性和研究起步較晚等原因，大田條件下某些方面的播種技術(shù)仍需系統(tǒng)研究。有關(guān)滇重樓種子室內(nèi)出苗率的研究，前人已做了大量有效的工作。李恒等研究認(rèn)為，滇重樓種子需經(jīng)過兩冬一夏才能完成形態(tài)學(xué)后熟和生理學(xué)后熟，休眠期為18個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間，二次休眠是重樓種子的生理特性，也是重樓種子長(zhǎng)期不萌發(fā)的原因[2-4]；李運(yùn)昌研究認(rèn)為，重樓種子自然條件下2 a才能出苗，出苗率難達(dá)50 %，采用高低溫變溫處理后，1 a內(nèi)即可萌發(fā)，出苗率達(dá)60 %[5]；陳偉等報(bào)道，種子從采集當(dāng)年的9-12月到第二年冬季之前完成形態(tài)成熟及各器官的發(fā)育，大田表現(xiàn)為種子只發(fā)根不出苗，且種子成熟與生長(zhǎng)環(huán)境無(wú)關(guān)[6]；周濃等通過超聲和赤霉素處理均可提高出根率和縮短出苗時(shí)間；王艷芳等[9]認(rèn)為種皮、果實(shí)成熟度和赤霉素影響了滇重樓種子的發(fā)根率和發(fā)根速度[7-8]；熊海浪等研究了華重樓、滇重樓和七葉一支花的組織培養(yǎng)，認(rèn)為重樓屬植物的離體培養(yǎng)具有很大難度，建立完善的離體培養(yǎng)體系仍需更多嘗試[10-14]。大田條件下滇重樓的栽培也取得了可喜的進(jìn)展，劉濤等提出了滇重樓林下規(guī)范化種植生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程[15]；陳翠等研究了滇重樓種苗種植密度、遮陽(yáng)度和種苗分級(jí)對(duì)滇重樓生長(zhǎng)的影響，認(rèn)為最適宜的滇重樓種苗根狀莖為10 g左右，種植密度為10 cm×20 cm，遮陽(yáng)網(wǎng)遮蔭，遮蔭率在60 %左右[16-19]；陳翠等還研究不同溫度、不同播種方式（播種時(shí)間、覆土厚度、地膜覆蓋）等因素對(duì)云南重樓種子萌發(fā)和出苗的影響，是大田條件下研究滇重樓播種技術(shù)較早和較全面的研究[16-19]。種子分級(jí)播種、合理播種時(shí)間以及播種基質(zhì)是大田中重要的播種環(huán)節(jié)，相應(yīng)地這些環(huán)節(jié)前人研究較少。筆者重點(diǎn)研究不同種子大小、胚根長(zhǎng)度以及相應(yīng)的播種基質(zhì)和播種深度對(duì)滇重樓出苗率的影響，優(yōu)化大田播種技術(shù)，以期為大田生產(chǎn)提供較強(qiáng)操作性的育苗技術(shù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 重樓種子
滇重樓種子于2013年10月4日采自云南省麗江市玉龍縣魯?shù)猷l(xiāng)麗江云鑫綠色生物開發(fā)有限公司重樓健壯植株的種子。試驗(yàn)材料經(jīng)中國(guó)科學(xué)院西雙版納熱帶植物園標(biāo)本館周仕順工程師鑒定為滇重樓（Paris polyphylla smith var.yunnanensis（Franch.） Hand.-Mazz）。
1.1.2 試驗(yàn)地
試驗(yàn)地位于云南省普洱市寧洱縣普義鄉(xiāng)，海拔1 492 m，年均降雨量1 414.9 mm，年均溫18.2 ℃，土壤為黑沙壤土，pH為5.23。試驗(yàn)地搭建2.5 m高遮陽(yáng)網(wǎng)，遮光度為60 %，育苗床為板瓦型，深度為20-25 cm，寬度為1.2-1.4 m。2013年12月23日播種。
1.2 方法
1.2.1 不同種子大小處理
1.2.1.1 種子大小分級(jí)處理
剔除有病斑、蟲眼和機(jī)械損傷的種子，用游標(biāo)卡尺測(cè)量其最大橫徑和直徑，計(jì)算面積（種子投影多為橢圓形，因此面積公式為S=πab）。以大小為種子分級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)，將種子分為1-5號(hào)種子，1號(hào)種子：S≥1 cm2；2號(hào)種子：0.8 cm2≤S<1 cm2；3號(hào)種子：0.65=""><0.8 cm2；4號(hào)種子：0.5=""><0.65><0.5>
1.2.1.2 不同種子大小處理
隨機(jī)選取各級(jí)別供試種子6份，每份為100粒，做2種播種處理，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)：①腐殖土：將種子點(diǎn)播于過細(xì)篩的腐葉土上，播種后用腐葉土覆土，覆土深度以不見種子為度；②土-沙：播種基質(zhì)下層為腐殖土，播種后用干凈的河沙覆土，覆土深度以不見種子為度。以上各處理播種后各蓋一層松針，加強(qiáng)田間管理，土壤濕度（土壤相對(duì)含水量）不低于70 %，澆水少量多次。播種后5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月和18個(gè)月統(tǒng)計(jì)出苗率。
1.2.2 不同胚根長(zhǎng)度的處理
采收的成熟果實(shí)（果皮開裂、種皮為鮮紅色）洗去果肉，稍微晾干，作濕砂層積催芽，在室內(nèi)處理80 d后（胚根突破種皮種子數(shù)占種子總數(shù)的80 %以上），將種子突破種皮的胚根長(zhǎng)度按以下幾種方式分類：①剛露白≤L<><0.5><種子直徑的2倍（0.5><1.0><種子直徑4倍（1.0><2 cm）；④種子直徑的4倍及以上（l≥2="" cm）。隨機(jī)選取以上4種種子各3份，每份100粒，做播種處理，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，播種于過細(xì)篩的腐葉土上，覆土深度以不見種子和胚根為度，再蓋上一層1="" cm厚的松針，加強(qiáng)田間管理，土壤濕度（相對(duì)含水量）不低于70="">
1.2.3 不同土壤水分處理
取2號(hào)種子2份，每份100粒，播種于土-沙的基質(zhì)中，覆土深度以不見種子為度，田間的水分管理按以下2種方式處理：①保持基質(zhì)潮濕（土壤容積含水量為60 %-70 %左右）；②自然水分管理，只是在旱季表土見干揚(yáng)灰時(shí)澆1次水。從2014年1-12月，每月隨機(jī)選擇5 d調(diào)查土壤含水量，統(tǒng)計(jì)其土壤的平均含水率。播種后7個(gè)月、18個(gè)月統(tǒng)計(jì)其出苗率。
1.2.4 不同播種深度處理
選取胚根長(zhǎng)度是種子直徑的4倍及以上（L≥2 cm）的種子18份，每份100粒，按以下播種方式處理：①播種基質(zhì)腐殖土（沙壤土），播種深度以不見種子和胚根為度；②播種基質(zhì)腐殖土（沙壤土），播種深度2 cm；③播種基質(zhì)腐殖土（沙壤土），播種深度4 cm；④播種基質(zhì)壤土，播種深度以不見種子和胚根為度；⑤播種基質(zhì)壤土，播種深度2 cm；⑥播種基質(zhì)壤土，播種深度4 cm。播種后蓋上一層1 cm厚的松針，加強(qiáng)田間管理，土壤濕度（相對(duì)含水量）不低于70 %。分別在播后5個(gè)月、6個(gè)月和18個(gè)月調(diào)查出苗率。
1.3 指標(biāo)計(jì)算方法
出苗率/%=（出苗數(shù)÷播種種子總數(shù)）×100。
所有的數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Microsoft Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同種子大小的處理
不同種子大小對(duì)出苗率和出苗時(shí)間在不同播種基質(zhì)上有不同程度的影響（圖1、表1）。從表1可看出，播種基質(zhì)為腐殖土，播種后5個(gè)月、6個(gè)月和7個(gè)月均未出苗，18個(gè)月1號(hào)種子和2號(hào)種子出苗率均達(dá)60 %以上，3號(hào)種子出苗率為40 %，4號(hào)種子出苗率30 %，5號(hào)種子未出苗。播種基質(zhì)為土-沙，播種后5個(gè)月1號(hào)至5號(hào)種子出苗率分別為：11.67 %、13.25 %、7.67 %、6.5 %、0；播種后6個(gè)月出苗率分別為：25 %、32.75 %、22 %、19.5 %、0；播種后7個(gè)月的出苗率分別為27 %、33.5 %、22 %、20.5 %、0；18個(gè)月出苗率為85.33 %、89 %、62.67 %、61.33 %、0。
而經(jīng)過多重比較，種子大小對(duì)出苗率的影響差別較大。1號(hào)種子和2號(hào)種子，在腐葉土上出苗率均無(wú)顯著性差異；在土-沙的播種基質(zhì)中，2號(hào)種子出苗率比1號(hào)種子高，播后5個(gè)月、6個(gè)月和7個(gè)月的出苗率差異顯著，但是18個(gè)月后差異則不顯著，可能是大粒種子通過休眠的時(shí)間較長(zhǎng)。除2號(hào)種子外，其余種子均隨著體積增大，表現(xiàn)出出苗時(shí)間較快和出苗率較高的現(xiàn)象。因此，2號(hào)種子（0.8 cm2≤S<1 cm2）無(wú)論是出苗時(shí)間還是出苗整齊度均好于其他種子，應(yīng)屬于一級(jí)種子；1號(hào)種子（s≥1="" cm2）在本次實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為多數(shù)種子通過休眠的時(shí)間較長(zhǎng)，即出苗時(shí)間和出苗整齊度略次于2號(hào)種子，歸為二級(jí)種子；3號(hào)與4號(hào)種子之間在土-沙中不存在顯著差異，但是在腐葉土上差異極顯著。目前，大田播種仍以腐葉土或者本地土壤為主，因此，筆者認(rèn)為3號(hào)種子與4號(hào)種子應(yīng)為不同級(jí)別的種子，分別為3級(jí)種子（0.65=""><0.8 cm2）和4級(jí)種子（0.5=""><0.65><0.5>
多重比較還表明，不同播種基質(zhì)對(duì)未經(jīng)崔苗種子的出苗時(shí)間和出苗率有顯著影響。出苗時(shí)間：腐殖土上播種的種子直至播后的18個(gè)月才開始出苗；土-沙的播種基質(zhì)中播后5個(gè)月就開始出苗，以2號(hào)種子為例，5個(gè)月出苗率為13.25 %，6個(gè)月為32.75 %，7個(gè)月為33.50 %，出苗時(shí)間比腐殖土上直接播種提前了近1 a。土-沙組合基質(zhì)上播種的種子出苗率也遠(yuǎn)高于腐葉土，以播種后18個(gè)月同級(jí)別種子之間的出苗率比較分析為例，土-沙播種的出苗率1號(hào)種子比腐葉土高24.66 %，2號(hào)種子高26.33 %，3號(hào)種子高22.67 %，4號(hào)種子高37 %。3號(hào)與4號(hào)種子在土-沙之間差異不顯著，而在腐葉土上差異顯著，說明土-沙的基質(zhì)還可克服種子本身的缺陷，如胚營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過少，在漫長(zhǎng)的解除休眠過程中消耗了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而不能出苗現(xiàn)象，土-沙的播種基質(zhì)使種子提早出苗，通過根系和子葉及時(shí)獲得營(yíng)養(yǎng)，極大提高了成活率和種子的利用率。
2.2 不同胚根長(zhǎng)度的處理
不同胚根長(zhǎng)度的處理結(jié)果見表2。由表2可看出，胚根長(zhǎng)度越長(zhǎng)其出苗率相對(duì)較高，當(dāng)胚根長(zhǎng)度是種子直徑4倍及以上（L≥2 cm）出苗率最高，播種5個(gè)月出苗率達(dá)23.82 %，6個(gè)月73.43 %，18個(gè)月80.67 %，平均比胚根長(zhǎng)度L<0.5 cm的高出55.89="" %，胚根長(zhǎng)度0.5=""><1.0 cm的高出36.02="" %，胚根長(zhǎng)度1.0=""><2 cm的高出14.37="" %，差異顯著或極顯著。其次是胚根長(zhǎng)度為1.0=""><2><0.5 cm）高出10.95="" %，胚根長(zhǎng)度（0.5=""><1.0 cm）高出8.78=""><2 cm，播后18個(gè)月出苗率均不足20="" %，且在試驗(yàn)田種中仍有陸續(xù)出苗的現(xiàn)象。胚根長(zhǎng)度可能代表了種子解除休眠的程度，胚根突破種皮即露白，可能只是完成胚的后熟。從表2數(shù)據(jù)來看，當(dāng)胚根長(zhǎng)度大于2="">
2.3 不同土壤水分的處理
2014年1-12月4個(gè)處理區(qū)的土壤水分的變化情況見圖2。由圖2可以看出，土壤水分含量對(duì)重樓種子出苗率和出苗時(shí)間均有不同程度的影響：在潮濕條件下播后7個(gè)月出苗率達(dá)33.5 %，自然條件下出苗率為零，實(shí)驗(yàn)田表現(xiàn)為只長(zhǎng)胚根而不出苗。18個(gè)月后，即播后的第2年7月份（雨季）土壤濕潤(rùn)后，潮濕條件下的出苗率為89.33%，比自然條件下出苗率高，差異達(dá)極顯著。據(jù)調(diào)查，農(nóng)戶將重樓種植在房前屋后（常年潮濕），種子凋落后8-12個(gè)月后也能萌發(fā)，但是轉(zhuǎn)移到一般地塊（土壤含水量主要有雨水供給）出苗率極低，甚至不出苗。因此，土壤的含水量也是影響滇重樓種子萌發(fā)的主要因素之一，生產(chǎn)上應(yīng)加以重視。
2.4 不同播種深度的處理
不同播種處理的出苗率見圖3。從圖3可以看出，播種基質(zhì)為腐殖土（沙壤土）：2號(hào)種子為例，播后5個(gè)月出苗率播種深度0 cm≈2 cm>播種深度4 cm。播后6個(gè)月出苗率播種深度2 cm≈0 cm>播種深度4 cm；播后18個(gè)月的出苗率，播種深度2 cm≈0 cm>播種深度4 cm。結(jié)果表明，腐葉土播種深度以播種深度0-2 cm最適宜，一般不宜超過4 cm。播種基質(zhì)為黑壤土：播后5個(gè)月出苗率播種深度0 cm≈2 cm>播種深度4 cm；播后6個(gè)月出苗率播種深度0 cm>播種深度2 cm>播種深度4 cm；播后18個(gè)月出苗率播種深度0 cm≈2 cm>播種深度4 cm。結(jié)果表明：黑壤土播種深度以0-2 cm為宜，一般不宜超過4 cm。
不同播種基質(zhì)對(duì)已經(jīng)催芽處理種子出苗率的影響，存在較大的差異。如播種為同一深度，其出苗率不同，播后5個(gè)月2種基質(zhì)上出苗率無(wú)顯著差異，播后6個(gè)月和18個(gè)月，播種深度0 cm，2 cm與4 cm出苗率腐葉土均顯著高于黑壤土。因此，已經(jīng)催芽的種子，較適合的基質(zhì)為腐殖土。
3 討論
3.1 重樓種子大小分級(jí)
一般種子以粒大、飽滿、色正為較優(yōu)的種子，但本研究結(jié)果表明，滇重樓種子在播種后5、6、7個(gè)月1號(hào)種子（大粒種子）的出苗率較2號(hào)種子（中粒種子）低，差異顯著，只是到18個(gè)月后則無(wú)顯著差異。此結(jié)果與陳偉[6]等的研究有較高程度的吻合，認(rèn)為中等大?。?.024-0.028 g）的種仁具有最高的萌發(fā)率，是因?yàn)榇罅７N子的出苗率可能是受到過分發(fā)胚乳的抑制，因而延長(zhǎng)了其出苗的時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)以出苗率、出苗整齊度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，將滇重樓種子分為4個(gè)等級(jí)：一級(jí)種子（0.8 cm2≤S<1 cm2），二級(jí)種子（s≥1="" cm2），三級(jí)種子（0.65=""><0.8 cm2）和四級(jí)種子（0.5=""><0.65>
3.2 滇重樓種子二次休眠影響
滇重樓種子具有二次休眠的特征，表現(xiàn)為只長(zhǎng)根不出苗。孟繁蘊(yùn)認(rèn)為滇重樓種子0-180 d完成胚形態(tài)后熟，還需再進(jìn)行一次低溫處理，才能解除生理休眠，促進(jìn)下胚軸的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)滇重樓種子經(jīng)過80 d沙藏處理后，胚根突破種皮占總數(shù)的83.2 %，重樓胚根突破種皮，袁理春等[20]認(rèn)為當(dāng)胚根長(zhǎng)于1.5 cm時(shí)可判斷滇重樓完成種子胚芽和胚根各器官的發(fā)育。而根據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即當(dāng)胚根長(zhǎng)度L≥2 cm后播種，播后6個(gè)月出苗率即可達(dá)70 %以上，依次是胚根長(zhǎng)度1.0 cm≤L<2 cm，0.6=""><1.0><0.6 cm，但是18個(gè)月后三者出苗率扔不足20="">
二次休眠可由內(nèi)部基因的表達(dá)誘導(dǎo)，但是多數(shù)種子的二次休眠乃是因環(huán)境因素的不利。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為引起重樓二次休眠主要受溫度的調(diào)控，因此多用變溫處理促進(jìn)種子的萌發(fā)。而土壤水分對(duì)重樓種子的萌發(fā)關(guān)注較少，其中王艷芳等[9]認(rèn)為種子萌發(fā)及胚根生長(zhǎng)受沙藏的濕度影響不大。本實(shí)驗(yàn)觀察了自然狀態(tài)下和保持土壤容積含水量為60 %-70 %的地塊重樓種子的出苗率，發(fā)現(xiàn)后者顯著高于前者，33.5 %種子的出苗時(shí)間可提前1 a，因此認(rèn)為，土壤水分也是影響出苗的主要因素，應(yīng)加以重視。
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