蛋白定量的方法很多，大家最為熟悉的就是ELISA和WB了，下面我們來介紹一個新方法——Luminex xMAP技術(shù)。
（一）Luminex多因子定量分析技術(shù)
1、Luminex多因子定量分析技術(shù)發(fā)展歷程
1997年 | Clinical Chemisty雜志介紹Luminex技術(shù) |
2001年 | Luminex技術(shù)獲美國FDA認(rèn)證，成為唯一得到FDA許可的用于臨床診斷的多指標(biāo)檢測技術(shù) |
2005年6月 | 基于Luminex技術(shù)的文章發(fā)表在“Nature”雜志上 |
2005年11月 | 全球科技產(chǎn)業(yè)研究權(quán)威機構(gòu)Frost&Sullivan授予Luminex技術(shù)“年度國際臨床診斷技術(shù)革新大獎” |
2、原理
Luminex多因子液相分析技術(shù)（Luminex xMAP），工作原理是將2種不同的熒光素加入微球中，根據(jù)不同的比例將微球（聚苯乙烯微珠或超順磁的微珠）Luminex 篩選和性能分析檢測采用顏色編碼的，這些微珠包被有對目標(biāo)分析物特異性的抗體。
首先，能識別不同目標(biāo)分析物的微珠混合后與待檢樣本孵育。微珠捕獲到分析物后，分為100種，形成二維矩陣（圖一），
圖一
將不同捕獲抗體包被在不同熒光強度的微球上形成捕獲微球，和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品中相應(yīng)的抗原或蛋白結(jié)合，再經(jīng)由多個生物素標(biāo)記的特異性檢測抗體混合物識別，再與鏈霉親和素-PE熒光素結(jié)合，形成“三明治”夾心復(fù)合物（圖二），
圖二
在流式系統(tǒng)上通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性，檢測抗體是帶有PE熒光素標(biāo)記的，通過檢測抗體的熒光信號強度定量目的蛋白（圖三，有2束激發(fā)光，633nm的激發(fā)光識別編碼微球，532nm的激發(fā)光激發(fā)檢測抗體上的PE熒光，用于反應(yīng)結(jié)果識別）。
圖三
也被稱作高通量的ELISA，二者的區(qū)別見（圖四）。
圖四
3、Luminex檢測平臺
4、Luminex檢測平臺操作流程
5、應(yīng)用
應(yīng)用領(lǐng)域 | 分析物類型 |
免疫 | 細(xì)胞因子 |
炎癥 | 炎癥因子 |
心血管疾病 | 趨化因子 |
腫瘤 | 粘附因子 |
腎毒性 | 脂肪因子 |
代謝 | 血管生成蛋白 |
神經(jīng) | 腫瘤標(biāo)記物 |
細(xì)胞間作用 | 基質(zhì)金屬蛋白酶 |
……… | ……… |
案例分享：
（1）卵巢癌早期多指標(biāo)篩選
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20368574
通過Luminex多因子檢測將CA-125、HE4、CEA、VCAM-1作為早期篩查卵巢癌的指標(biāo)。
（2）乳腺癌進(jìn)展Biomarker篩選
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20368574
通過Luminex多因子檢測將MMP-9/NGAL作為乳腺癌進(jìn)展評估的篩查的Biomarker。
