移植（transplantation）是指將一個(gè)體的細(xì)胞、組織或器官用手術(shù)或其他方法移植到自體或另一個(gè)體的某一部位。移植的細(xì)胞、組織或器官稱(chēng)為移植物，提供移植物的個(gè)體稱(chēng)為供者（donor），而接受移植的個(gè)體稱(chēng)為受者（recipient）。根據(jù)移植物來(lái)源及供、受者遺傳背景的差異，將移植分為四種類(lèi)型：①自體移植（autograft）：是指把來(lái)自移植受者本身的組織移植到受者；②同種同基因移植（syngraft）：是指遺傳結(jié)構(gòu)完全相同或非常相似的個(gè)體（同卵孿生子或近交系動(dòng)物）之間的移植；③同種異基因移植（allograft）：是指同一動(dòng)物種內(nèi)遺傳結(jié)構(gòu)不同個(gè)體之間的移植；④異種移植(xenograft)：是指不同動(dòng)物種個(gè)體之間的移植，如動(dòng)物器官移植給人。
現(xiàn)代移植學(xué)科的發(fā)展已經(jīng)可將多種細(xì)胞、組織或器官進(jìn)行移植，輸血是較早開(kāi)展的細(xì)胞移植，腎移植是最早成功的器官移植。隨著放射療法、免疫抑制藥物的應(yīng)用和器官保存技術(shù)、植入技術(shù)的提高，腎、肝、肺、心臟和骨髓移植已成為很多病人組織器官功能衰竭末期唯一的根治性治療手段。
受者與移植物之間的排斥反應(yīng)是移植成功的主要障礙。移植排斥（transplantation rejection ）是指受者免疫系統(tǒng)識(shí)別移植抗原后產(chǎn)生免疫應(yīng)答，進(jìn)而破壞移植物的過(guò)程。引起移植排斥的抗原為移植抗原（transplantation antigen），即組織相容性抗原，人類(lèi)的主要組織相容性抗原稱(chēng)為人類(lèi)白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA抗原），是主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex, MHC)的編碼產(chǎn)物，是移植排斥的分子基礎(chǔ)。HLA-I類(lèi)抗原（HLA-A、B、C）廣泛表達(dá)于一切有核細(xì)胞表面，II類(lèi)抗原（HLA-DR、DQ、DP）主要表達(dá)在活化的巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及活化的T細(xì)胞表面。自體移植和同種同基因的移植不發(fā)生排斥。
在同種異基因移植或異種移植中，移植成功的關(guān)鍵取決于供、受者間組織相容性抗原是否一致或相近。根據(jù)排斥反應(yīng)發(fā)生的時(shí)間、強(qiáng)度及病理學(xué)改變可分為超急性排斥、急性排斥和慢性排斥反應(yīng)。①超急性排斥反應(yīng)（hyperacute rejection）是在移植物血液循環(huán)恢復(fù)后數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)（也可在24~48h）內(nèi)發(fā)生的排斥反應(yīng)，由體液免疫介導(dǎo)，其原因是受者體內(nèi)預(yù)先存在抗供者同種異型抗原（如HLA抗原、ABO血型抗原、血小板抗原等）的抗體。移植術(shù)后，抗體與移植物細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，激活補(bǔ)體，導(dǎo)致血管通透性增強(qiáng)，中性粒細(xì)胞和血小板聚集，纖維蛋白沉積，血管內(nèi)凝血和血栓形成；組織病理學(xué)特點(diǎn)是早期引起毛細(xì)血管內(nèi)大量中性粒細(xì)胞聚集，小動(dòng)脈血栓形成，繼之出現(xiàn)缺血、變性、壞死。超急排斥反應(yīng)可見(jiàn)于移植術(shù)前反復(fù)多次輸血、多次妊娠、長(zhǎng)期血液透析或再次移植的個(gè)體，也可由于移植抗原與病原微生物具有共同抗原所致。②急性排斥反應(yīng)（acute rejection）是同種移植后最常見(jiàn)的排斥反應(yīng)，多發(fā)生在移植后1周至3個(gè)月內(nèi)，其發(fā)生機(jī)制是：①體液免疫應(yīng)答，受者產(chǎn)生針對(duì)移植物血管內(nèi)皮細(xì)胞MHC抗原的IgG 類(lèi)抗體，通過(guò)激活補(bǔ)體而導(dǎo)致細(xì)胞損傷；②細(xì)胞免疫應(yīng)答，移植物內(nèi)皮細(xì)胞表面的同種抗原激活T細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，活化炎癥細(xì)胞；細(xì)胞毒T細(xì)胞可直接殺傷靶細(xì)胞，造成移植物血管內(nèi)皮損傷。③慢性排斥反應(yīng)（chronic rejection）多發(fā)生于移植術(shù)后數(shù)月或數(shù)年，病程緩慢。目前認(rèn)為慢性排斥反應(yīng)是急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作的結(jié)果，導(dǎo)致移植物組織的退行性變。細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答均參與慢性排斥反應(yīng)。
移植的檢查主要是移植前檢測(cè)同種異體抗體和HLA分型，選擇最合適的供者和受者。骨髓或造血干細(xì)胞移植時(shí)，須計(jì)數(shù)移植物中造血干細(xì)胞的數(shù)量，判斷造血干細(xì)胞采集的最佳時(shí)機(jī)。移植后的實(shí)驗(yàn)檢查可了解移植物的存活狀況、功能，并指導(dǎo)免疫抑制劑治療和監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)等，對(duì)成功移植具有重要意義。
器官移植受者體內(nèi)預(yù)存抗體，主要來(lái)自天然血型抗體。受者因多次妊娠、反復(fù)輸血和接受血液制品，接受過(guò)異種或異體移植，或者某些細(xì)菌／病毒感染后由類(lèi)屬抗原誘生的抗HLA 抗體或其他針對(duì)組織細(xì)胞的抗體，尤其是與血管內(nèi)皮細(xì)胞抗原結(jié)合的抗體，當(dāng)這些預(yù)存的抗體進(jìn)入移植器官后，與其血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，激活補(bǔ)體導(dǎo)致血管損傷，移植物受損。移植前篩選出這些抗體，防止超急排斥和急性排斥反應(yīng)，提高移植物存活率具有重要的意義。
㈠ 適應(yīng)證：各種移植術(shù)前篩選供者和受者。
㈡ 標(biāo)本采集
1、供者為肝素抗凝血、受者為血清。18~25℃保存并盡快送檢，避免污染細(xì)菌等。
2、血清標(biāo)本可在室溫保存24h； 2~8℃可保存一周；長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-80ºC。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本應(yīng)避免溶血。
㈢ 檢測(cè)方法
1、補(bǔ)體依賴(lài)淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)
補(bǔ)體依賴(lài)淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)(complement dependent cytotoxicity, CDC)是通過(guò)檢測(cè)受者血清中是否存在有針對(duì)供體的補(bǔ)體依賴(lài)的淋巴細(xì)胞毒抗體，以此來(lái)確保同種異體移植不發(fā)生超急性或急性排斥。CDC的原理是：被檢血清中的抗體與供者淋巴細(xì)胞膜表面相應(yīng)抗原結(jié)合后激活補(bǔ)體，引起細(xì)胞膜破損，這種抗體稱(chēng)細(xì)胞毒抗體。如將含有此抗體的血清與淋巴細(xì)胞和補(bǔ)體共同孵育，淋巴細(xì)胞將被破壞，細(xì)胞膜通透性增加，染料得以滲入使細(xì)胞著色。根據(jù)著色的死細(xì)胞數(shù)目，可以估計(jì)淋巴細(xì)胞毒的強(qiáng)度。
2、群體反應(yīng)性抗體測(cè)定
群體反應(yīng)性抗體（panel reactive antibodies, PRA）是指群體反應(yīng)性抗HLA-IgG抗體，是各種組織器官移植術(shù)前篩選致敏受者的重要指標(biāo)，與移植排斥反應(yīng)和存活率密切相關(guān)。PRA的常用方法：①ELISA-PRA：酶標(biāo)板用純化的包括當(dāng)?shù)厝朔N絕大部分的HLA特異性抗原預(yù)先包被，檢測(cè)時(shí)將待檢血清加入并孵育一定時(shí)間后，加入酶標(biāo)記的抗人IgG或IgM的人單克隆抗體，再加入酶作用的底物顯色，根據(jù)顏色的深淺，可測(cè)定出HLA抗體的特異性和滴度。②CDC-PRA：在預(yù)先用淋巴細(xì)胞（含當(dāng)?shù)厝朔N絕大部分的HLA特異性抗原）包被的微孔板中加入受者血清和補(bǔ)體，反應(yīng)一定時(shí)間后用染料染色，計(jì)數(shù)死細(xì)胞（被染色的細(xì)胞）百分率，并由此判斷PRA陽(yáng)性或陰性。
3. 流式細(xì)胞術(shù)交叉配型
流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometric crossmatching, FCC）測(cè)定供者淋巴細(xì)胞反應(yīng)性同種抗體，具有高度的靈敏性。FCM的原理是：將受者血清與供者淋巴細(xì)胞共同孵育后，用熒光素標(biāo)記的抗人IgG或IgM的單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光染色，在流式細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度的強(qiáng)弱及陽(yáng)性細(xì)胞百分率，從而判斷受者血清中有無(wú)抗供者淋巴細(xì)胞的HLA抗體存在。
㈣參考范圍
1、CDC法：<10%為陰性，>10%為陽(yáng)性。
2、ELISA-PRA或CDC-PRA：＜10%為陰性，＞10%~50 %為陽(yáng)性，＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性。
3、FCC：>10%為陽(yáng)性。
㈤ 臨床意義
1、移植前篩查致敏受者：器官移植受者體內(nèi)預(yù)存抗體，尤其是特異性抗HLA抗體，是影響移植物存活和排斥反應(yīng)的重要因素，移植前篩選出這些抗體具有重要的臨床意義。補(bǔ)體依賴(lài)淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)只能檢測(cè)受者體內(nèi)的補(bǔ)體依賴(lài)性抗體，但無(wú)法確定是IgG或是IgM抗體，然而影響移植效果的卻只是特異性的IgG抗體；ELISA-PRA法既可測(cè)補(bǔ)體結(jié)合的，也可測(cè)非補(bǔ)體結(jié)合的抗HLA-IgG抗體，且不受IgM干擾和感染的影響等而得到廣泛應(yīng)用，尤其對(duì)于二次移植以及有過(guò)妊娠和輸血史的受者應(yīng)作為一項(xiàng)必須進(jìn)行的檢測(cè)項(xiàng)目。由于CDC-PRA能反映受者體內(nèi)的抗體活性，目前在臨床上仍在使用。移植前抗體水平對(duì)器官存活有明顯影響。資料顯示：首次移植時(shí)，10%~50%致敏的受者較<10%的無(wú)致敏狀態(tài)者一年半移植腎存活率低7％，>50％的受者移植腎存活率低50％；>10%的患者，移植后延遲器官功能發(fā)生率明顯高于<10%的患者。由于HLA抗體的波動(dòng)及輸血等因素的影響，腎移植前受者應(yīng)定期檢測(cè)其血清HLA抗體，一般每月至少一次。
2、監(jiān)測(cè)移植后排斥反應(yīng)：受者移植后抗HLA抗體的產(chǎn)生和排斥反應(yīng)與急性排斥反應(yīng)和慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)。腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)的患者經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，40%的病例存在抗供者抗體，而未發(fā)生排斥反應(yīng)的僅有9%帶有抗供者抗體；慢性排斥反應(yīng)患者中57%能找到此類(lèi)抗體，移植物存活4年以上的病例僅2%~4%帶有此類(lèi)抗體。因此，抗供者抗體的檢測(cè)可做為術(shù)后排斥反應(yīng)的一種監(jiān)測(cè)方法。
㈥ 評(píng)價(jià)與問(wèn)題
1、淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)是補(bǔ)體依賴(lài)的，補(bǔ)體的質(zhì)量直接影響到試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，故要妥善地保管好補(bǔ)體。補(bǔ)體應(yīng)避免受熱或反復(fù)凍融；兔補(bǔ)體應(yīng)保存于-80ºC冰箱，在-20ºC只能保存3個(gè)月。補(bǔ)體依賴(lài)的淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)只能檢測(cè)補(bǔ)體結(jié)合的抗體。IgM對(duì)結(jié)果有干擾作用。
2、ELISA-PRA法既可檢測(cè)補(bǔ)體結(jié)合的，也可測(cè)非補(bǔ)體結(jié)合的抗HLA-IgG抗體。不受IgM的干擾和感染的影響。
3、FCC比淋巴細(xì)胞毒法靈敏度更高，但目前尚未普及。
4、抗供者抗體的檢測(cè)有其固有的局限性：由于移植器官可以吸收一定量的抗體，結(jié)合到血管內(nèi)皮上的抗體可被溶解、吸收，所以循環(huán)中可能測(cè)不到抗供者抗體的存在，并不能說(shuō)明無(wú)體液免疫的損傷。
5、為了查明受者血清中是否存在自身抗體，必要時(shí)可進(jìn)行自身交叉配型（autocrossmatching）試驗(yàn)，即用受者自身淋巴細(xì)胞和血清進(jìn)行細(xì)胞毒試驗(yàn)，若存在自身抗體，可出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。自身抗體存在可造成FCC出現(xiàn)假陽(yáng)性。
器官移植成功的關(guān)鍵是選擇適合的供受者，即ABO血型相符，HLA型別相同或相近。目前認(rèn)為HLA-DR位點(diǎn)抗原是最重要的，HLA-DQ、DP在移植中亦有重要意義，其次是HLA-A、B抗原，HLA-C對(duì)移植過(guò)程意義較小。
移植前的組織配型或組織相容性試驗(yàn)，是指對(duì)某一個(gè)體的表型和基因型的HLA特異性鑒定。通過(guò)組織配型試驗(yàn)，選擇與受者組織相容性抗原近似的供者，可降低急性移植排斥反應(yīng)發(fā)生的頻率和強(qiáng)度，從而延長(zhǎng)移植物的存活。供者與受者的ABO血型一致是各種移植的前提。腎臟移植的長(zhǎng)期存活與供、受者HLA抗原， 特別是HLA-DR抗原相容性密切相關(guān)。骨髓移植時(shí)則要求HLA抗原完全一致，否則會(huì)出現(xiàn)劇烈的移植物抗宿主反應(yīng)。
㈠ 適應(yīng)證：各種移植術(shù)前篩選供者和受者
㈡ 標(biāo)本采集
1、肝素抗凝血
2、常規(guī)分離淋巴細(xì)胞后立即檢測(cè)。
3、淋巴細(xì)胞懸液避免污染有脂肪、細(xì)菌以及其他雜質(zhì)等顆粒。
㈢ 檢測(cè)方法
1、 血清學(xué)分型：HLA血清學(xué)分型采用補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)，其原理為：使用標(biāo)準(zhǔn)的HLA分型抗體與受者的淋巴細(xì)胞混合，加入補(bǔ)體，抗體與HLA抗原特異結(jié)合后激活補(bǔ)體， 使淋巴細(xì)胞膜受損或裂解，然后用染料（臺(tái)酚藍(lán)或伊紅）染色，通過(guò)在顯微鏡下計(jì)數(shù)死亡淋巴細(xì)胞的百分比判定結(jié)果。死亡細(xì)胞死亡百分率高為陽(yáng)性，說(shuō)明待檢淋巴細(xì)胞的HLA型與標(biāo)準(zhǔn)HLA型一致；陰性時(shí)說(shuō)明待檢淋巴細(xì)胞的HLA型與標(biāo)準(zhǔn)分型抗體HLA不一致。血清學(xué)分型法主要用于檢測(cè)HLA-A、B、C位點(diǎn)上的抗原。
2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture, MLC）：將供者與受者的淋巴細(xì)胞混合在一起進(jìn)行體外培養(yǎng)一定時(shí)間后，由于二者細(xì)胞表面HLA抗原不同，淋巴細(xì)胞通過(guò)識(shí)別對(duì)方HLA抗原而活化增殖并轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，通過(guò)判定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況，確定混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixed lymphocyte reaction，MLR）的強(qiáng)弱，二者HLA差異越大，MLR越強(qiáng)，反之越弱。
MLC分為單向法和雙向法，單向法是先將刺激細(xì)胞（供者來(lái)源）用Ｘ線(xiàn)、絲裂霉素處理，阻止淋巴細(xì)胞DNA合成，使其失去活化能力，但保留其抗原性，將此處理過(guò)的刺激細(xì)胞和反應(yīng)細(xì)胞（受者）混合培養(yǎng)3天，再加入３H－TdR繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后收集細(xì)胞，置閃爍計(jì)數(shù)器內(nèi)測(cè)定摻入細(xì)胞內(nèi)的３H－TdR的cpm值，計(jì)算刺激指數(shù)（stimulation index, SI），來(lái)反映MLR的程度。雙向法的培養(yǎng)時(shí)間和測(cè)定方法與單向MLC相同，所不同的是兩個(gè)體的淋巴細(xì)胞不經(jīng)任何處理而進(jìn)行培養(yǎng)，兩個(gè)體的淋巴細(xì)胞都有具有刺激能力和反應(yīng)能力。
⒊ HLA的基因分型
由于應(yīng)用血清學(xué)方法對(duì)HLA-II類(lèi)抗原（DR、DQ、DP）的配型較為困難，因此推動(dòng)了在分子水平上的基因配型（DNA配型）技術(shù)的發(fā)展?；蚺湫图夹g(shù)通過(guò)比較供、受者HLA抗原的DNA序列，判定供、受者間基因是否相同或相近，從而達(dá)到更快、更準(zhǔn)確地選擇供、受者，并更有可能在同基因中進(jìn)行成功的移植。其主要方法如下 ：
⑴限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）分析：由于不同個(gè)體堿基順序的差別造成了限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)數(shù)和位置的不同，從而產(chǎn)生數(shù)量和長(zhǎng)度不一的DNA酶切片段，即RFLP。將人DNA的酶切片經(jīng)電泳分離、變性后轉(zhuǎn)移至硝纖膜上，再用同位素標(biāo)記的HLA基因探針與之雜交，最后經(jīng)放射自顯影可顯示出與HLA基因雜交的DNA片段。這一方法可用來(lái)測(cè)定 HLA復(fù)合體各基因位點(diǎn)上等位基因的多態(tài)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明這一方法比血清學(xué)分析能揭示更大的多態(tài)性，雖然這一方法還存在一些問(wèn)題，如電泳帶型復(fù)雜、不易分析等，但它卻為基因分型的進(jìn)一步發(fā)展奠定了重要基礎(chǔ)。
⑵PCR-RFLP分析：利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）的特異性擴(kuò)增作用將特定基因片段擴(kuò)增5~6個(gè)數(shù)量級(jí)，而后進(jìn)行RELP，因此只需少量標(biāo)本即可檢測(cè)。若選擇合適的酶，使一種等位基因擴(kuò)增片段的切點(diǎn)減少，可簡(jiǎn)化電泳帶型，使之易于分析。
⑶PCR-SSO法：序列特異性寡核苷酸(sequence specific oligonucleotide，SSO)是PCR擴(kuò)增特定基因片段后，針對(duì)一、兩個(gè)核苷酸差別設(shè)計(jì)SSO探針，而測(cè)出一個(gè)核苷酸的差別。這一方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，特異性強(qiáng)，所需樣品量少，適于大規(guī)模檢測(cè)。
⑷PCR-SSCP法：?jiǎn)捂湗?gòu)象多態(tài)性（single strand conformational polymorphism，SSCP）是基于單股核酸在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率與其長(zhǎng)度及順序有關(guān)，將以PCR擴(kuò)增的DNA片段加熱變性成為單鏈后進(jìn)行電泳、染色，即可通過(guò)分析帶型鑒別等位基因。該方法簡(jiǎn)便、快速，而且還有一個(gè)重要的特點(diǎn)是不需制備探針。
⑸PCR-SSP法：PCR-序列特異引物（sequence specific probe, SSP）法：以HLA抗原基因特異性引物擴(kuò)增受者與供者DNA，以能擴(kuò)增出引物特異性產(chǎn)物判斷有無(wú)相應(yīng)HLA特異序列是否存在。本法具有與PCR-SSO相似的敏感性和特異性，而且所需樣本少，操作簡(jiǎn)便、對(duì)環(huán)境污染小，臨床應(yīng)用較多。
目前HLA基因分型技術(shù)仍在不斷改進(jìn)、完善，還可根據(jù)需要選擇性地將上述方法結(jié)合起來(lái)應(yīng)用。
㈣ 參考范圍
1、血清學(xué)分型法：死亡細(xì)胞＜10%為陰性，＞10%陽(yáng)性。
2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法：SI≤2為陰性，SI＞2~4為弱陽(yáng)性，SI＞6~8為陽(yáng)性反應(yīng)。
㈤ 臨床意義
1、臨床器官移植時(shí)，常用的HLA分型包括①I(mǎi)類(lèi)：HLA-A、B、（C）位點(diǎn)，②II類(lèi)：HLA-DR、DQ、DP位點(diǎn)，各位點(diǎn)中相合的越多，移植成功的概率越大。
2、血清學(xué)分型法中死亡的淋巴細(xì)胞越多，表示受者體內(nèi)細(xì)胞毒抗體滴度越高。淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)為陰性的供者、受者才考慮進(jìn)行移植，＞10%為移植禁忌。
3、目前細(xì)胞學(xué)分型常用單向MLC法，刺激細(xì)胞必須是純合子配型細(xì)胞，即細(xì)胞上只有一種HLA-II類(lèi)抗原。若反應(yīng)細(xì)胞不與之反應(yīng)（不發(fā)生淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化），則證明反應(yīng)細(xì)胞上有與刺激細(xì)胞相同的HLA-II類(lèi)抗原。雙向MLC可以選擇出HLA-II類(lèi)相容的供者，但不能確定HLA-II類(lèi)的具體抗原，單向MLC可確定HLA-II抗原。
MLC除了用于HLA分型外，還可作為體外的移植免疫模型，具體應(yīng)用于以下幾方面：①進(jìn)一步鑒定血清學(xué)檢測(cè)得到的供、受者間HLA抗原是否完全相符；②預(yù)測(cè)供、受者間HLA-A、B或DR位點(diǎn)抗原不符的移植物的預(yù)后，即受者對(duì)供者的免疫應(yīng)答程度：③評(píng)價(jià)移植后受者免疫反應(yīng)是供者特異性的或是非特異性的；④移植術(shù)后判定供者和受者間免疫應(yīng)答程度，估計(jì)使用類(lèi)固醇等免疫抑制劑時(shí)間；⑤研究同種及異種識(shí)別機(jī)制。
㈥ 評(píng)價(jià)與問(wèn)題
1、淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)都必須以受檢者的淋巴細(xì)胞作為檢測(cè)標(biāo)本，大大地限制了檢測(cè)方法的應(yīng)用范圍；而且還存在抗體來(lái)源困難、細(xì)胞培養(yǎng)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。
2、基因分型法快速、準(zhǔn)確，試劑來(lái)源容易，應(yīng)用范圍廣，陳舊或微量的標(biāo)本都可進(jìn)行檢測(cè)，有逐漸取代血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)分型法的趨勢(shì)，但仍需不斷改進(jìn)、完善，需將不同方法結(jié)合起來(lái)應(yīng)用。
造血干/祖細(xì)胞移植可以快速重建造血功能，已成為一些血液系統(tǒng)和實(shí)體腫瘤、免疫性疾病、遺傳性疾病、代謝性疾病治療的最有效的手段之一，近年來(lái)臨床應(yīng)用逐漸增多，尤其是外周血自體造血干/祖細(xì)胞移植的應(yīng)用更為廣泛。
造血干/祖細(xì)胞存在于骨髓和外周血中，形態(tài)與淋巴細(xì)胞形似，用普通形態(tài)學(xué)方法難以識(shí)別。由于造血干/祖細(xì)胞表面可表達(dá)CD34和CD45抗原且具有較高的核酸含量，因而可用CD34和CD45單克隆抗體和核酸染料進(jìn)行三色免疫熒光染色，F(xiàn)CM多參數(shù)分析血液、骨髓和濃縮白細(xì)胞懸液中造血干/祖細(xì)胞的數(shù)量。FCM不但可以計(jì)數(shù)造血干/祖細(xì)胞占有核細(xì)胞的比例，而且能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)每微升血液或骨髓中造血干/祖細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量。
㈠ 適應(yīng)證：骨髓或外周血干細(xì)胞移植。
㈡ 標(biāo)本采集：肝素或EDTA抗凝的骨髓、外周血、采集的單個(gè)核細(xì)胞。
㈢ 檢測(cè)方法：流式細(xì)胞術(shù)三色絕對(duì)計(jì)數(shù)法（ProCOUNT法）：在定量的被測(cè)標(biāo)本中加入熒光素標(biāo)記的抗CD34、CD45單克隆抗體和核酸染料及已知數(shù)量的熒光微球，經(jīng)熒光染色后溶解紅細(xì)胞，在流式細(xì)胞儀上經(jīng)488nm波長(zhǎng)激光激發(fā)，檢測(cè)CD45+CD34+和含核酸量多的細(xì)胞，計(jì)為造血干祖細(xì)胞。
㈣ 參考范圍
表15-1-1. 健康成年人外周血CD34+造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考范圍*
細(xì)胞類(lèi)型 百分比 （個(gè)/ul）
CD34＋細(xì)胞（％CD45＋細(xì)胞） 0.006~0.045
CD34＋細(xì)胞（％有核細(xì)胞 ） 0.006~0.045
CD34＋細(xì)胞絕對(duì)數(shù) 0.320~3.50
CD45＋細(xì)胞絕對(duì)數(shù) 4300~9380
有核細(xì)胞絕對(duì)數(shù) 4300~9380
*北京市190例健康成年人調(diào)查結(jié)果，ProCOUNT法。
㈤ 臨床意義：正常外周血中造血干/祖細(xì)胞數(shù)量極少，每微升血液中僅有0.320~3.50個(gè)。患者在進(jìn)行外周血自體造血干/祖細(xì)胞移植前，常需要用化療和造血刺激因子（如G-CSF）聯(lián)合動(dòng)員，使骨髓快速釋放更多造血干/祖細(xì)胞至外周血中而便于富集。臨床實(shí)踐表明，CD34+造血干/祖細(xì)胞計(jì)數(shù)可以準(zhǔn)確評(píng)價(jià)骨髓動(dòng)員效果、判斷最佳的采集時(shí)機(jī)，估計(jì)采集物、臍帶血中造血干/祖細(xì)胞移植的效果，而且對(duì)一些疾病，如再生障礙性貧血、骨髓增生異常綜合征、骨髓病性貧血等的診斷與鑒別診斷、療效監(jiān)測(cè)有一定意義。
㈥ 評(píng)價(jià)與問(wèn)題：CD34+細(xì)胞不論是在骨髓（BM）、臍帶血（CB）或動(dòng)員外周血中，含量均很低。利用流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)CD34+細(xì)胞時(shí)，經(jīng)常受非特異性粘附及標(biāo)本中的碎片影響，使測(cè)定結(jié)果重復(fù)性及準(zhǔn)確性受影響，國(guó)際上相繼出臺(tái)了多種標(biāo)準(zhǔn)化方案，不同實(shí)驗(yàn)室及移植中心使用的方法也有所差異，參考范圍并不一致。
通過(guò)一系列的檢測(cè)手段找到HLA相符的供者，并進(jìn)行了成功的移植手術(shù)，這并不意味移植的結(jié)束，為了使移植物長(zhǎng)期存活，需要不間斷地監(jiān)測(cè)各種指標(biāo)。盡管人們?cè)谄鞴僖浦睬斑M(jìn)行多種配型試驗(yàn)，挑選適宜的供者，但在實(shí)際工作中很難找到HLA高度一致的供者，除同基因移植外，其他各種類(lèi)型的移植均可能會(huì)發(fā)生排斥反應(yīng)，最后導(dǎo)致移植器官的功能喪失，甚至對(duì)受者其他器官亦帶來(lái)很大的損害。移植后對(duì)受者進(jìn)行一系列的監(jiān)測(cè)，一方面有助于了解排斥反應(yīng)危象是否將發(fā)生，以便及早采取措施，使排斥反應(yīng)逆轉(zhuǎn)或阻止反應(yīng)進(jìn)展；另一方面有助于了解免疫抑制劑使用是否適當(dāng)。
㈠移植器官的功能監(jiān)測(cè)
移植器官的功能狀態(tài)是衡量移植成功的關(guān)鍵指標(biāo)。移植后要密切觀察其功能指標(biāo)，一方面可以了解移植器官的功能狀態(tài)，另一方面可以預(yù)測(cè)移植排斥反應(yīng)和調(diào)整藥物用量。引起移植器官功能喪失的原因除了排斥反應(yīng)，還有感染缺血和藥物的毒性等。首先根據(jù)有無(wú)發(fā)熱和移植物腫脹初步判斷移植器官的功能，但這些變化都是非特異性的。移植器官的功能測(cè)定根據(jù)移植物不同而異，多需做大量的生化和血液學(xué)指標(biāo)，如血常規(guī)檢查判斷有無(wú)感染，腎移植后的腎功能檢查，肝移植后的肝功能、凝血功能等檢查。某些輔助檢查例如B型超聲和彩色多普勒等對(duì)了解移植器官的形態(tài)、血管通暢性和血流量等也有一定的幫助。
㈡移植排斥反應(yīng)監(jiān)測(cè)
移植排斥反應(yīng)的臨床表現(xiàn)與其他原因如藥物的器官毒性作用或病原微生物感染的臨床表現(xiàn)非常相似，因此及早、準(zhǔn)確地診斷移植排斥反應(yīng)就顯得格外重要。若能早期明確診斷排斥反應(yīng)，通過(guò)適當(dāng)?shù)闹委熡锌赡苁古懦夥磻?yīng)逆轉(zhuǎn)或大大減輕，使移植器官或組織長(zhǎng)期存活并發(fā)揮功能。當(dāng)發(fā)現(xiàn)移植器官功能的改變時(shí)，已屬于排斥反應(yīng)的結(jié)果。免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)早于臨床排斥反應(yīng)或器官功能改變之前，具有重要意義。
1、外周血T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)：用流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞及其亞群，在急性排斥的臨床癥狀出現(xiàn)前1~5d，T細(xì)胞總數(shù)和CD4/CD8比值升高，巨細(xì)胞病毒感染時(shí)比值降低，一般認(rèn)為當(dāng)比值大于1.2時(shí)，預(yù)示急性排斥即將發(fā)生；比值小于1.0則感染的可能性很大。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)對(duì)急性排斥和感染的鑒別診斷有重要價(jià)值。
2、受者HLA抗體的檢測(cè)：受者移植后抗HLA抗體的產(chǎn)生與細(xì)胞排斥反應(yīng)，急性血管排斥反應(yīng)和慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)。腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)的患者經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢查發(fā)現(xiàn)，40%的病例存在抗供者抗體，而未發(fā)生排斥反應(yīng)的僅有9%帶有抗供者抗體；慢性排斥反應(yīng)患者中57%能找到此類(lèi)抗體，移植物存活4年以上的病例僅2%~4%帶有此類(lèi)抗體。因此，抗供者抗體的檢測(cè)可做為術(shù)后排斥反應(yīng)的一種監(jiān)測(cè)方法。但抗供者抗體的檢測(cè)也有局限性，由于移植器官可以吸收一定量的抗體，結(jié)合到血管內(nèi)皮上的抗體可被溶解、吸收，所以循環(huán)中可能測(cè)不到抗供者抗體的存在，并不能說(shuō)明無(wú)體液免疫的損傷。
3、自然殺傷細(xì)胞（NK）活性測(cè)定：用流式細(xì)胞儀測(cè)定NK活性有助于判定排斥反應(yīng)。移植后因免疫抑制劑的應(yīng)用，殺傷細(xì)胞的活性受抑制，但在急性排斥前會(huì)明顯增高。
4、細(xì)胞因子和粘附分子：某些細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IFN-γ等），某些可溶性細(xì)胞因子受體在排斥反應(yīng)時(shí)可升高。如T細(xì)胞激活后可釋出IL-2R，在急性排斥和病毒感染時(shí)IL-2R的血清含量升高，以巨細(xì)胞病毒感染時(shí)增高最明顯。環(huán)抱霉素A腎毒性所致的腎功能減退時(shí)，血清肌酐值增高，而IL-2R明顯降低；血清肌酐和IL-2R同時(shí)增高對(duì)急性排斥的診斷有意義；但個(gè)體間血清IL-2R的含量差別顯著，無(wú)公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，限制了它的臨床的應(yīng)用，動(dòng)態(tài)測(cè)定可克服這一缺點(diǎn)。
5、補(bǔ)體水平及急性相蛋白：排斥反應(yīng)時(shí)消耗補(bǔ)體可致補(bǔ)體水平下降。C-反應(yīng)蛋白（CRP）是血清中的一種急性相反應(yīng)蛋白，在排斥反應(yīng)和炎癥時(shí)升高，尤其對(duì)炎癥反應(yīng)較為敏感。
㈢、免疫抑制劑治療監(jiān)測(cè)
排斥反應(yīng)是免疫應(yīng)答引起的，所以免疫抑制是一項(xiàng)有效的預(yù)防措施。最初應(yīng)用的是化學(xué)免疫抑制劑，每一種化學(xué)免疫抑制劑都是直接干擾、影響移植排斥反應(yīng)的某個(gè)階段，因?yàn)樽饔脵C(jī)制不同，所以幾種藥物聯(lián)合使用可以提高免疫抑制效果。但是這些免疫抑制劑都是非特異的，會(huì)降低受者全身免疫功能，從而使患者易感染和繼發(fā)腫瘤，且還存在其他毒副作用。對(duì)于毒副作用大的藥物在應(yīng)用過(guò)程中要監(jiān)測(cè)血藥濃度，使有效劑量控制在最小范圍，減少毒副作用的發(fā)生。臨床常用的有以下幾種：糖皮質(zhì)激素、硫唑嘌呤、環(huán)孢菌素A（Cyclosporin A，CsA）、FK506（是從土壤真菌中分離出來(lái)的一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，后來(lái)發(fā)現(xiàn)有極強(qiáng)免疫抑制作用），除此之外雷公藤、冬蟲(chóng)夏草等中藥也具有免疫抑制作用。這些免疫抑制劑都是非特異的，會(huì)降低受者全身免疫功能，從而使對(duì)感染和腫瘤的抵抗能力降低，且還存在其他毒副作用。免疫抑制劑應(yīng)用過(guò)程中要監(jiān)測(cè)血藥濃度，使有效劑量控制在最小范圍，減少毒副作用的發(fā)生。
生物免疫抑制劑，如抗T淋巴細(xì)胞抗體或抗淋巴細(xì)胞血清通過(guò)抑制某一活化階段的淋巴細(xì)胞及淋巴因子，從而預(yù)防和治療排斥反應(yīng)，已經(jīng)成為很有前途的免疫抑制療法。在使用過(guò)程中應(yīng)注意監(jiān)測(cè)血液T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)更有意義。
㈣感染的監(jiān)測(cè)
免疫抑制劑在抑制排斥反應(yīng)的同時(shí)，也抑制宿主對(duì)各種病原微生物的抵抗力，由此引發(fā)一系列（特別是病毒）的感染。主要為各種原因的機(jī)會(huì)感染。感染是導(dǎo)致移植病人死亡的主要原因。應(yīng)監(jiān)測(cè)以下項(xiàng)目，及早發(fā)現(xiàn)并治療感染。
1、全血血細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)：中性粒細(xì)胞比例升高提示細(xì)菌感染，而淋巴細(xì)胞比例升高提示病毒感染。
2、免疫學(xué)檢測(cè)病原體抗原或抗體：移植后易引起CMV、HBV感染爆發(fā)，90%以上的機(jī)會(huì)感染均發(fā)生在應(yīng)用免疫抑制劑時(shí)。移植前應(yīng)選擇抗-CMV、抗-HCV、HBsAg陰性的供者。
3、血培養(yǎng)：疑為感染時(shí)，應(yīng)盡快做血培養(yǎng)，若培養(yǎng)分離出的病原菌應(yīng)加做藥敏試驗(yàn)，有利于選擇用藥。一旦確定感染病原體應(yīng)立即使用敏感藥物抑制感染。值得注意的是在應(yīng)用免疫抑制劑抑制排斥反應(yīng)的同時(shí)，也應(yīng)用抗微生物制劑抑制感染，預(yù)防感染比治療更重要。
腎移植主要用于治療不可逆慢性腎功能衰竭，在臨床器官移植中開(kāi)展最多、療效最穩(wěn)定和最顯著，移植存活率達(dá)90%~95%。
1、移植前常規(guī)檢查：首先檢查供受者的血、尿、便常規(guī)試驗(yàn)，血清電解質(zhì)、血清轉(zhuǎn)氨酶、腎功能；抗-CMV、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV等。
2、移植前組織相容性檢查：⑴選擇ABO血型相同的供受者；⑵CDC 和PRA檢測(cè)受者血清抗淋巴細(xì)胞和HLA抗體；⑶選擇HLA血清型或基因型最佳匹配或相近的供者。實(shí)踐證明，HLA相符的程度越高，移植后腎的存活率越高，HLA-DR、B及A位點(diǎn)尤為重要。
3、移植后監(jiān)測(cè)：包括臨床癥狀、組織活檢、生化以及免疫學(xué)檢測(cè)。主要有⑴常規(guī)應(yīng)用免疫抑制劑，如FK506和強(qiáng)的松聯(lián)合使用，監(jiān)測(cè)環(huán)孢霉素A、FK506血藥濃度；⑵定期檢測(cè)受者血清HLA抗體，可作為一項(xiàng)免疫狀態(tài)預(yù)示指標(biāo)；⑶定期檢測(cè)T細(xì)胞亞群、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、粘附分子等；⑷密切觀查尿蛋白、血肌酐、尿素氮等腎臟功能指標(biāo)。肌酐升高超過(guò)25％提示急性排斥反應(yīng)。
晚期或終末期心肺疾患常規(guī)治療無(wú)效時(shí)，移植是唯一有效的方法。心臟由于能耐受缺血的時(shí)間非常短，供心不考慮HLA相配的程度即移植給某一受者是完全允許的，一些人提出心臟移植只要求ABO血型相同，大小相配即可。
肺移植的配型原則與心臟移植一致，只要求ABO血型相符，供肺與受區(qū)大小相配，供者胸片清晰，血?dú)庵盗己眉纯?。但HLA（DR、B位點(diǎn)）相容可減少移植排斥反應(yīng)的發(fā)生；可減少激素用量；可提高心、肺移植的存活率。
移植前供受者全面的血、尿、便常規(guī)；肝腎功能；胸透、心電、腹部B超；抗-CMV、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV等常規(guī)檢查的前提下，進(jìn)行組織相容性的檢查： ⑴選擇ABO血型相同的供受者；⑵CDC 和 PRA檢測(cè)受者血清HLA抗體；⑶MLC選擇基因型相近的供受者及預(yù)測(cè)供者和受者間免疫應(yīng)答程度。
移植后常規(guī)應(yīng)用免疫抑制劑應(yīng)監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)，如定期檢測(cè)T細(xì)胞亞群、HLA抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、粘附分子等；還要密切監(jiān)測(cè)心、肺功能，如心電、B超、血?dú)夥治龅?。明確排斥反應(yīng)要靠心內(nèi)膜或支氣管鏡活檢。
肝移植是治療終末期肝病、爆發(fā)性肝功能衰竭、先天性肝代謝缺陷和局限于肝內(nèi)無(wú)法切除的腫瘤的有效治療手段。肝移植的排斥反應(yīng)發(fā)生比腎移植在機(jī)率上少得多，程度也較輕。主要要求ABO血型相符，大小相配。但這并不是說(shuō)肝移植的效果與HLA配型無(wú)關(guān)，或HLA配型在肝移植受者選擇時(shí)不重要，相反HLA配型肯定可以改善肝移植的效果，減少與免疫應(yīng)答無(wú)關(guān)的其他術(shù)后并發(fā)癥。
移植前仍同腎、心、肺移植一樣，做供受者全面系統(tǒng)的常規(guī)檢查及組織相容性的檢查；移植后常規(guī)應(yīng)用免疫抑制劑時(shí)監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)，如T細(xì)胞亞群、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、粘附分子等；密切監(jiān)測(cè)肝臟功能，當(dāng)發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)，血清膽紅素、轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶升高；膽紅素是肝臟功能減退的敏感指標(biāo)。確診排斥反應(yīng)需行經(jīng)皮肝穿活檢明確診斷。
骨髓移植主要用于白血病、淋巴瘤、重型再生障礙性貧血、重癥海洋性貧血、先天免疫缺陷等疾病的造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)重建。與肝、腎、心等移植器官相比，骨髓移植更易發(fā)生排斥反應(yīng)，原因是宿主殘存的免疫細(xì)胞排斥了供髓細(xì)胞；而一旦供髓植活后又可發(fā)生移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)，其原因是移植骨髓中的免疫活性細(xì)胞，對(duì)受者產(chǎn)生的排斥反應(yīng)。GVHD是骨髓移植的主要障礙，也是骨髓移植后的主要并發(fā)癥和死亡原因。
HLA配型與骨髓移植的效果關(guān)系極為密切。供受者在移植前必須進(jìn)行嚴(yán)格的組織配型，使HLA盡可能一致。在供者選擇上，首先在同胞中用血清學(xué)分型法和（或）基因分型法篩查HLA，結(jié)果相差不大后再作混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)檢測(cè)并核實(shí)HLA配型。即使血清學(xué)或分子生物學(xué)方法所不能檢出的HLA抗原的差別往往可通過(guò)MLC檢出。
移植前供受者在全面的血、尿、便常規(guī)，肝、腎功能，抗-CMV、HBsAg、HCV、HIV等常規(guī)檢查的前提下，進(jìn)行組織相容性的檢查： ⑴選擇ABO血型相同的供受者；⑵CDC 和 ELISA 法檢測(cè)受者血清HLA抗體；⑶選擇基因型相近的供受者，骨髓移植建議使用基因方法配型。移植后繼續(xù)應(yīng)用免疫抑制劑后應(yīng)密切監(jiān)測(cè)移植排斥反應(yīng)，如T細(xì)胞亞群、抗HLA抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子等；密切觀查白細(xì)胞、血小板數(shù)量，防止發(fā)生感染和出血。骨髓移植后血液中網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸升高，尤其是含RNA高的網(wǎng)織紅細(xì)胞升高是骨髓移植成功的早期標(biāo)志之一。
造血干細(xì)胞存在于外周血中，但濃度很低。應(yīng)用某些造血生長(zhǎng)因子包括G-CSF或GM-CSF及在強(qiáng)化療的恢復(fù)期，外周血中的造血前體細(xì)胞濃度（如CD34+細(xì)胞）顯著增加，這使得收集到合適數(shù)量移植用外周血干細(xì)胞成為可能。與自身骨髓比較，應(yīng)用外周血干細(xì)胞造血恢復(fù)更快，而且造血恢復(fù)快減少了移植死亡率，但沒(méi)有顯示其生存率方面的優(yōu)勢(shì)。對(duì)HLA相合的同胞供者，應(yīng)用生長(zhǎng)因子動(dòng)員的外周血干細(xì)胞移植，植活更快，而急性GVHD沒(méi)有增加。外周血干細(xì)胞移植慢性GVHD可能增加，從而復(fù)發(fā)率下降，而非復(fù)發(fā)死亡率有所增加，最后長(zhǎng)期總生存率有所改善。
自體造血干細(xì)胞移植分四個(gè)階段：①造血干細(xì)胞采集：包括造血干細(xì)胞采集、體外凈化、冷凍保存；②移植前預(yù)處理：大劑量放化療；③自體干細(xì)胞移植；④移植后處理。
外周血中CD34+細(xì)胞數(shù)量能比較準(zhǔn)確地反映機(jī)體的造血功能儲(chǔ)備，可以用來(lái)預(yù)測(cè)外周血干細(xì)胞的動(dòng)員效果。目前常用G-CSF 5~10μg/Kg/d。以G-CSF 10μg/Kg/d劑量動(dòng)員，CD34+細(xì)胞產(chǎn)率明顯高于3~5μg/Kg/d劑量的動(dòng)員效果。正常供者應(yīng)用G-CSF動(dòng)員后第3d，CD34+細(xì)胞增高，第5d達(dá)最高，第8d后明顯下降。以外周血CD34+細(xì)胞數(shù)量來(lái)指導(dǎo)外周血干細(xì)胞采集時(shí)機(jī)的選擇更準(zhǔn)確，一般建議外周血CD34+細(xì)胞達(dá)到（20～40）×106/L時(shí)開(kāi)始外周血干細(xì)胞采集。
移植后造血重建：應(yīng)用預(yù)處理方案后數(shù)日至一周患者外周血細(xì)胞數(shù)達(dá)到最低點(diǎn)，然后由移植的干細(xì)胞生成的細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)在外周血中，造血恢復(fù)的快慢取決于干細(xì)胞的來(lái)源、移植后生長(zhǎng)因子的應(yīng)用情況以及GVHD預(yù)防方案等。如果是骨髓干細(xì)胞移植，患者中性粒細(xì)胞＞0.1×109/L需要16d，而中性粒細(xì)胞＞0.5×109/L需要22d。采集G-CSF動(dòng)員的外周血干細(xì)胞移植可以比骨髓干細(xì)胞移植提前恢復(fù)近一周。移植后應(yīng)用生長(zhǎng)因子（如G-CSF或GM-CSF）可以進(jìn)一步加速恢復(fù)3~5天。檢測(cè)干細(xì)胞植活的指標(biāo)，包括：紅細(xì)胞抗原（ABO、Rh等），HLA抗原，細(xì)胞遺傳學(xué)（Y染色體等），分子遺傳學(xué)分析等。異基因移植后，如果供受者性別不同，最常用性染色體原位熒光雜交法來(lái)確定植活，HLA不相合者應(yīng)用HLA配型來(lái)確定，如果對(duì)同性別HLA相合的移植可以采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析或微衛(wèi)星檢測(cè)來(lái)確定植活與否。
移植后免疫重建：相對(duì)于造血干細(xì)胞移植后造血重建而言，免疫重建要慢得多，研究更困難復(fù)雜。移植后免疫異常表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞數(shù)量低下，T淋巴細(xì)胞亞群比例異常，免疫球蛋白合成受損，細(xì)胞免疫功能缺陷等。移植后免疫功能的異常使得患者容易感染各種病毒、細(xì)菌和霉菌等，而這些感染常常是引起移植死亡的主要原因之一。所以移植后定期常規(guī)檢測(cè)免疫功能變化情況對(duì)預(yù)測(cè)感染合并癥意義重大。
造血干細(xì)胞移植后監(jiān)測(cè)免疫重建的實(shí)驗(yàn)包括：總淋巴細(xì)胞數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞亞型分析（包括CD3、CD4、CD8、CD16、CD56、CD19和CD20等），體外T細(xì)胞增殖反應(yīng)，T細(xì)胞和NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性檢測(cè)，免疫球蛋白定量，對(duì)球蛋白疫苗的免疫反應(yīng)等。其中總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血淋巴細(xì)胞免疫表型型分析必須依靠流式細(xì)胞儀絕對(duì)計(jì)數(shù)法定期追蹤。
NK細(xì)胞（CD16+CD56+）是造血干細(xì)胞移植后最早出現(xiàn)的淋巴細(xì)胞亞群，常在移植后第一個(gè)月之內(nèi)恢復(fù)功能。淋巴細(xì)胞低下持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)而且經(jīng)常伴有CD4/CD8比例倒置。CD4+細(xì)胞數(shù)恢復(fù)比CD8+細(xì)胞數(shù)更緩慢。特別有慢性GVHD的患者，移植后數(shù)月CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)仍然很低。產(chǎn)生表面免疫球蛋白的成熟B淋巴細(xì)胞在移植3個(gè)月外周血中達(dá)到正常水平。CD19+B細(xì)胞、CD19+CD20+B細(xì)胞和CD19+CD5+B細(xì)胞在前3個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)，但CD19+B細(xì)胞數(shù)一般在移植后一年才恢復(fù)正常。細(xì)胞和體液免疫功能的完全恢復(fù)需要一年甚至更長(zhǎng)時(shí)間，特別有慢性GVHD者免疫功能的異?？赡軙?huì)持續(xù)數(shù)年之久，對(duì)這類(lèi)患者數(shù)年后仍需要監(jiān)測(cè)免疫功能的變化情況。
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