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高危型人乳頭瘤狀病毒(HR-HPV)持續(xù)感染宮頸后,通過其基因產(chǎn)物干擾正常的細(xì)胞周期調(diào)節(jié),導(dǎo)致細(xì)胞的連續(xù)增殖與惡性轉(zhuǎn)化。p16INK4A基因產(chǎn)物是細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制物(CDKI),負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,由于HPVE7蛋白阻斷了p16INK4A的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián),因此在HR-HPV感染的宮頸癌及癌前病變組織中出現(xiàn)p16INK4A過表達(dá)。p16INK4A與HPV聯(lián)合監(jiān)測(cè)將提高宮頸癌篩查的有效性,有助于宮頸癌的診斷與鑒別診斷。

在正常細(xì)胞，細(xì)胞周期受周期素（cyclin）和周期素依賴性激酶（CDK）的正性調(diào)節(jié)，在G1期，cyclinD1和CDK4或CDK6結(jié)合后，磷酸化滅活pRb，釋放轉(zhuǎn)錄因子E₂F，促進(jìn)細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。同時(shí)p16^INK4A等幾個(gè)CDK抑制基因?qū)?xì)胞周期進(jìn)行負(fù)調(diào)節(jié)，其產(chǎn)物p16^INK4A蛋白可與cyclin D1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合CDK4或CDK6，并特異性地抑制CDK4活性，使之不能磷酸化pRb，阻止細(xì)胞進(jìn)入S期，從而形成了p16^INK4A-cyclinD-CDK4-pRb精細(xì)調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián)，在此級(jí)聯(lián)中，pRb-E₂F復(fù)合物也抑制基因p16^INK4A本身的轉(zhuǎn)錄。

    在HR-HPV感染所致的宮頸癌及癌前病變中，pRb被HPV E7蛋白滅活，阻斷了p16^INK4A結(jié)合CDK4/6降低pRb磷酸化途徑，同時(shí)減少了pRb-E₂F復(fù)合物，使p16^INK4A失去負(fù)反饋抑制，其轉(zhuǎn)錄和翻譯將相應(yīng)提高而引起過表達(dá)。

宮頸痛前病變的演進(jìn)與HR-HPV的持續(xù)感染有非常強(qiáng)烈的聯(lián)系。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為：HR-HPV致癌基因E6和E7在宮頸癌及癌前病變細(xì)胞中高表達(dá)可表現(xiàn)為p16^INK4A的過表達(dá)。

在宮頸鱗狀上皮中，p16^INK4A在HR-HPV感染所致癌前病變和癌組織中有高水平表達(dá)，而在HPV陰性的宮頸癌和正常組織、細(xì)胞中無陽性表達(dá)。Kanao等分析25例宮頸鱗癌和11例正常宮頸組織，用RT-PCR和PCR-RFLP法分別檢測(cè)p16^INK4AmRNA和HPV DNA。在25例宮頸鱗癌中，21例HR-HPV陽性，陽性率為84%。在21例HPV陽性的癌組織中，17例p16^INK4A mRNA過表達(dá)，陽性率為81%。在4例HPV陰性的癌組織中，3例p16^INK4AmRNA表達(dá)明顯減弱，在11例正常宮頸組織中，p16^INK4A和HPV均為陰性。由此認(rèn)為，在HPV所致宮頸癌中，E6和E7致癌蛋白使p53和Rb抑癌基因失活，而導(dǎo)致p16^INK4A過表達(dá)，但是在HPV陰性的癌組織中，由于p16^INK4A的損傷，使p53和Rb功能異常，有助于癌變的發(fā)生。而且，Kalof等證實(shí)，p16^INK4A免疫表達(dá)和HR-HPV的檢出率隨著宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤樣變的級(jí)別進(jìn)展而增強(qiáng)、增高。

在宮頸癌中，宮頸腺癌的發(fā)病率約占5%～10%，近年有逐年遞增的趨勢(shì)，但是宮頸腺癌及原位腺癌在篩查中常常被漏診。研究證明，HR-HPV是宮頸腺上皮癌變的主要病因，同時(shí)p16^INK4A免疫組化染色在HR-HPV陽性的宮頸腺上皮內(nèi)瘤變、原位腺癌及腺癌中，著色彌漫、均質(zhì)、強(qiáng)烈，而在正常宮頸腺上皮無表達(dá)，因此將HR-HPV檢驗(yàn)和p16NK4A免疫染色作為宮頸癌篩查項(xiàng)目將提高宮頸腺癌的檢出率。

在罕見的宮頸惡性腫瘤中，也發(fā)現(xiàn)p16^INK4A過表達(dá)和HPV感染。Parwani等取10例宮頸腺基底細(xì) 胞癌組織標(biāo)本，用原位雜交法檢測(cè)HR-HPV DNA 和免疫組化檢測(cè)p16^INK4A表達(dá)。發(fā)現(xiàn)所有標(biāo)本均為HR-HPV陽性和p16^INK4A過表達(dá)。

由于只有高危性HPV持續(xù)感染并整合入宿主細(xì)胞基因組才能導(dǎo)致宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化，而一過性的感染并不號(hào)引起CIN的發(fā)生，因此，HR-HPV陽性對(duì)宮頸上皮內(nèi)高度病變的預(yù)測(cè)率始終很低。Petry等在德國(guó)常規(guī)宮頸癌篩查中，隨機(jī)選取8466例29歲以上婦女，用第二代雜交捕獲法（hybrid capture2，HC-2）檢測(cè)13種高危型HPV，研究HR-HPV感染與宮頸癌的關(guān)系，結(jié)果證明HR-HPV對(duì)宮頸上皮內(nèi)高度病變的陽性預(yù)測(cè)值僅為10.9%。但是，細(xì)胞內(nèi)p16^INK4A免疫染色陽性意味著HR-HPV DNA整合入宿主細(xì)胞基因組，并且導(dǎo)致了細(xì)胞的異常轉(zhuǎn)化，因此認(rèn)為，加人p16^INK4A檢測(cè)將提高對(duì)宮頸癌前病變風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)率。

目前，液基細(xì)胞學(xué)（liquid-based Pap test，LBPT）和醫(yī)生取材HC-2檢測(cè)HR-HPV相組合，被推薦為最佳宮頸癌篩查方案，已在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用。同時(shí)一些研究顯示，p16^INK4A是LBPT中的一個(gè)有意義的輔助性標(biāo)志物，而且比HR-HPV更敏感。Guo等將p16^INK4A免疫化學(xué)染色和HC-2法檢測(cè)HR-HPV用于分析210例異常宮頸液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，并同時(shí)取宮頸活檢組織標(biāo)本作為對(duì)照和診斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中，p16^INK4A陽性表達(dá)在低度鱗狀上皮病變（low-grade squamous intraepithelial lesions.LSILs）中為57.9%，在高度鱗狀上皮病變（HSILs）中為97.1%，兩者比較有明顯差異性（P<0.001）；HR-HPV陽性在LSILs為85%，在HSILs86.4%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.264）。在宮頸細(xì)胞學(xué)診斷為L(zhǎng)SIL的活檢組織標(biāo)本中，對(duì)于CIN Ⅱ/Ⅲ的陽性預(yù)測(cè)率，p16^INK4A為33.5%，HR-HPV為21.2%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。因此認(rèn)為，在對(duì)宮頸上皮內(nèi)高度病變的預(yù)測(cè)中，p16^INK4A比HR-HPV更有意義，在細(xì)胞學(xué)診斷為L(zhǎng)SIL的患者中，p16^INK4A免疫細(xì)胞染色可以選擇哪些患者需要進(jìn)一步行陰道鏡、活檢等檢查。

為了減少檢測(cè)費(fèi)用，Pientong等4比較了165例傳統(tǒng)宮頸巴氏涂片（conventional Pap test.CPT）和LBPT中p16^INK4A免疫細(xì)胞染色，同時(shí)研究p16^INK4A過表達(dá)和HR-HPV感染的關(guān)系。HPV DNA用PCR和斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)。證明，在CPT中：正常細(xì)胞、未確定意義的非典型鱗狀細(xì)胞（atypical squamous cells of undermined significance，ASCUS），LSIL，HSIL和鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinomas，SCC），p16^INK4A陽性率分別為0，52.5%，54.3%，100%和100%；HPV陽性率分別為10%，45%，57%，70%和86.7%。而且在HR-HPV陽性的HSIL和SCC中，p16^INK4A過表達(dá)率均為100%。在LBPT中顯示了相似的結(jié)果，因此認(rèn)為，在宮頸癌篩查中檢測(cè)HR-HPV感染所致的異型細(xì)胞，傳統(tǒng)巴氏涂片聯(lián)合p16^INK4A免疫細(xì)胞化學(xué)染色更方便實(shí)用，符合效價(jià)比。

未確定意義的ASCUS是一種不確定的宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果，其細(xì)胞異常程度比反應(yīng)性細(xì)胞改變內(nèi)病變。該診斷可重復(fù)性差，被稱為婦科細(xì)胞學(xué)診斷的灰色地帶。其中約20%的ASCUS經(jīng)組織活檢證實(shí)為HSIL，甚至宮頸癌。Nieh等選擇66例ASCUS同時(shí)做p16^INK4A的免疫細(xì)胞化學(xué)染色和陰道鏡宮頸活檢，以及HC-2檢測(cè)13種HR-HPV。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有21例HSIL及以上病變，其中20例p16^INK4A強(qiáng)陽性表達(dá)；24例LSIL中19例弱陽性表達(dá)：21例良性反應(yīng)性改變中無陽性表達(dá)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，p16^INK4A的表達(dá)強(qiáng)度與HR-HPV陽性負(fù)荷量呈正相關(guān)，而且在活檢組織病理證實(shí)無重要病變的ASCUS細(xì)胞學(xué)涂片中，p16^INK4A表達(dá)缺失，但是仍有較高的HR-HPV陽性率。通過對(duì)比分析，認(rèn)為從ASCUS中區(qū)分良性反應(yīng)性改變和LSIL，HSIL，直接可視性的p16^INK4A免疫染色比HR-HPV檢測(cè)更有效。

p16^INK4A的免疫染色有助于組織病理診斷的一致性。Klaes等隨機(jī)挑選190例宮頸錐切標(biāo)本，同時(shí)進(jìn)行HE染色和p16^INK4A的免疫組化染色，由5位病理學(xué)家獨(dú)自閱片，在190例病例中，組織病理診斷一致的有130例，其中浸潤(rùn)癌，CINⅢ，Ⅱ和Ⅰ的診斷符合率分別為94%，72%，35%和52%?？梢钥闯鰧?duì)于CINⅠ和CINⅡ診斷結(jié)果存在很大分歧。而在190例病例中175例p16^INK4A的免疫染色獲得一致評(píng)價(jià)，在各級(jí)診斷中符合率均>90%。Dray等用相同方法分析了189例宮頸活檢標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)p16^INK4A陽性表達(dá)和病理診斷HSIL的相關(guān)性>90%，在對(duì)26例組織學(xué)診斷和p16^INK4A的免疫染色不一致的病例回顧性分析中，最終改變了最初的組織病理學(xué)診斷，因此認(rèn)為，p16^INK4A免疫染色可以提高宮頸點(diǎn)活檢的病理診斷準(zhǔn)確性。Hu等選擇161例青少年宮頸活檢組織標(biāo)本（15例宮頸炎，48例CINⅠ，46例CINⅡ，52例CINⅢ），同時(shí)進(jìn)行p16^INK4A免疫組織化學(xué)染色和HPV DNA檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HR-HPV陽性的CINⅠ中，p16^INK4A免疫染色陽性率為39%，且為分散點(diǎn)狀或補(bǔ)丁樣染色：在HR-HPV陽性的CINⅡ/Ⅲ組織標(biāo)本中，p16^INK4A免疫染色陽性率為100%，且為彌漫全層染色。由此提示：p16^INK4A免疫染色可以區(qū)分低、高度CIN，p16^INK4A是HR-HPV持續(xù)感染的標(biāo)志物。

p16^INK4A免疫染色聯(lián)合HR-HPV檢測(cè)有助于原發(fā)性宮頸腺癌的鑒別診斷。Elishaev等報(bào)道了10例宮頸腺癌轉(zhuǎn)移至卵巢病例，其中5例卵巢腫瘤與宮頸腺癌同時(shí)發(fā)現(xiàn)，3例于宮頸腺癌后發(fā)現(xiàn)，2例先于宮頸腺癌發(fā)現(xiàn)。最初，這10例均認(rèn)為是卵巢原發(fā)性腺癌，但在以后的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，所有病例宮頸和卵巢腺癌組織中均包含相同的HPV類型和p16^INK4A的彌漫性表達(dá)，因此而明確診斷。在2例未發(fā)現(xiàn)宮頸病變的卵巢轉(zhuǎn)移性腺癌中，兩者的聯(lián)合檢測(cè)發(fā)現(xiàn)了隱藏的宮頸腺癌。Ansari-Lari等將p16^INK4A和HPV聯(lián)合檢測(cè)用于子宮內(nèi)膜腺癌（特別是子宮下段腺癌）和宮頸腺癌的鑒別診斷，證明p16^INK4A比HPV更敏感，操作更容易。Mikami等報(bào)道，在宮頸的胃腸道轉(zhuǎn)移性腺癌中，出現(xiàn)p16^INK4A頻繁表達(dá)缺失和HPV陰性，并指出兩者有明顯相關(guān)性，兩者均為陰性，提示宮頸腫瘤系轉(zhuǎn)移性癌，而非原發(fā)性癌。

因?yàn)閜16^INK4A只有在HR-HPV致癌基因整合到細(xì)胞基因組，并破壞了G1期調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián)，p16^INK4A才會(huì)過表達(dá)，即p16^INK4A的陽性表達(dá)意味著細(xì)胞已被啟動(dòng)了癌變程序。目前，在宮頸癌篩查中所用的各種細(xì)胞學(xué)和HR-HPV檢測(cè)方法都有一定的局限性，而p16^INK4A在宮頸上皮高度病變中過表達(dá)，并且隨著病變加重有一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的特性，克服了HPV對(duì)宮頸上皮高度病變陽性預(yù)測(cè)率低和細(xì)胞學(xué)敏感性差、陰性預(yù)測(cè)率低的缺點(diǎn)。而且其檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，易于操作，避免了形態(tài)學(xué)診斷的主觀性。因此，p16^INK4A和HR-HPV聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)宮頸上皮內(nèi)高度病變的診斷率.

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