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牛初乳是指母牛分娩后5 d內(nèi)分泌的乳汁,由于有苦澀味,加熱易凝固等特點(diǎn),過擊一般不作原料乳應(yīng)用而喂?;虮粭壷=陙?,牛初乳的營養(yǎng)保健作用日益受到重視。大量研究表明,牛初乳具有很高的營養(yǎng)價(jià)值,含有豐富的生物活性物質(zhì),具有調(diào)節(jié)人體代謝,提高機(jī)體免疫力和抗感染的功能 但有關(guān)其抗衰老作用的系統(tǒng)研究報(bào)道很少。我們參照“保健食品的功能學(xué)評價(jià)程序和檢驗(yàn)方法”研究了牛初乳粉對雌性小鼠部分臟器組織抗氧化酶活力、過氧化脂質(zhì)含量及對果蠅壽命的影響,期探索牛初乳粉的抗衰老作用。
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1 材料與方法
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1.1 材料--本文來自益生康健網(wǎng)(yeecare.com)
1.1.1 牛初乳粉由烏魯木齊奶業(yè)研究所提供。它是該所采用冷凍干燥和輻照滅菌等方法制成的牛初乳制劑。--本文來自益生康健網(wǎng)(yeecare.com)
1.1.2 美國野生型黑腹果蠅由華西醫(yī)科大學(xué)營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室提供
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1.1.3 昆明種雌性小鼠由新疆醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,13~1s月齡。
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1.1.4 小鼠飼料參照AOAC配方配制“、:蛋白質(zhì)10.O(酪蛋白)、植物油8.0 、混合鹽5.0%、混合維生素1 0 、纖維素(瓊脂)1.0 、淀粉75.O
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1.1.5 果蠅基礎(chǔ)飼料 玉米粉10.0 、紅糖5.O 、瓊指1.5 苯甲酸0.3 、干酵母粉1.0 、水82.2 。
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1.2 試劑與儀器
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1.2.1 試劑焦性沒食子酸(遵義市第二化工廠)、硫代巴比妥酸(上海酵母廠)、牛血清白蛋白(上海長陽生化制藥廠)。二甲腫酸鈉(Nacalai tesque inc)、四乙氧基丙烷(FIuka)、5,5一二硫?qū)σ欢趸郊姿?Fluka)。
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1.2.2 儀器721一分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)、勻漿器、離心機(jī)、恒溫水浴箱、恒溫箱、干燥箱、電子天平、培養(yǎng)管。
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1.3 方法
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1.3.1 小鼠部分臟器組織抗氧化酶活力和過氧化脂質(zhì)含量測定
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1.3.1.1 分組及喂養(yǎng)方法將小鼠隨機(jī)分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對照組,試驗(yàn)組小鼠飲用蒸餾水配制的牛韌乳粉乳液(濃度分別為9.0 g/L、45.0 g,L和225.0 g/L),對照組小鼠飲用蒸餾水,各組小鼠均食用AOAC飼料,喂養(yǎng)30 d。1 3.1.2 血樣稀釋液制備取鼠血10m 加入1 ml雙蒸水中,充分振搖,使之全部溶血測定。
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1.3.1.3 腎、肝、心肌組織勻漿制備剪取一定量的所需臟器,稱重,剪碎,至玻璃勻漿器中,加入冷生理鹽水,打成勻漿(10 ,w/V),以3 000 r/rain離心30min,取上清液測定。
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1.3.1.4 腎、肝、心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)活力測定采用酃苯三酚自氧化法。組織蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)法。
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1.3.1.5 腎、肝、全血各胱甘肽過氧化物酶(GSH Px)活力測定采用DTNB直接法
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1.3 1.6 腎、肝、心肌組織丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥酸比色法
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1.3.2 果蠅壽命試驗(yàn)收集12 h內(nèi)羽化的果蠅,用乙醚麻醉后,區(qū)分雌雄。將果蠅隨機(jī)分成3個(gè)劑量組和1個(gè)對照組,各劑量組飼料含受試物濃度分別為0.2 、1.O 和5.0 每組雌雄果蠅各40~50只。培養(yǎng)管規(guī)格為3 cmX]3 ct33.,每只管內(nèi)培養(yǎng)基厚度為0.5~1.0cm,用雙層無菌紗布封口。果蠅分組1w后給予受試物。培養(yǎng)管平放于溫度25士1℃、相對濕度62 的恒溫箱內(nèi),每4 d更換1次培養(yǎng)基,每天定時(shí)統(tǒng)計(jì)果蠅死亡數(shù)目,直到全部死亡。培養(yǎng)基牯住等因素造成的死亡不計(jì)算在內(nèi)。規(guī)定每個(gè)果蠅生存時(shí)間的代數(shù)和除以果蠅數(shù)目即為該組平均壽命;前半數(shù)果蠅存活天數(shù)的均值為半數(shù)死亡期}每組雖后死亡的10只果蠅存活天數(shù)的平均數(shù)為該組的最高壽命。
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2 結(jié)果
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2.1 牛初乳粉對小g,Cgp~抗氧化酶活性和過氧化脂質(zhì)含量的影響
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2.1.1 牛初乳粉對小鼠腎、肝、心肌組織SOD活力的影響。
可見,中、高劑量組小鼠腎、心肌組織SOD活力高于對照組小鼠,差別有顯著性;各劑量組小鼠肝組織中SOD活力有增加的趨勢,和對照組比較差別無顯著性。
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2.1.2 牛初乳粉對小鼠腎、肝、壘血GSH Px活力的影響
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可見:高劑量組小鼠腎、肝和各劑量組小鼠壘血GSH Px活力高于對照組,差別均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中、低劑量組小鼠腎、肝組織中GSH-Px活力與對照組比較,差別無顯著性。
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2.1.3 牛韌乳粉對小鼠腎、肝、心肌組MDA形成的影響
中、高劑量組小鼠肝及高劑量組小鼠心肌組織中MDA含量低于對照組,差別具有顯著性;各劑量組小鼠腎組織中MDA含量與對照組比較,差別無顯著性。
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2.2 牛初乳粉對果蠅壽命的影響
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2.2.1 牛初乳粉對果蠅半數(shù)死亡期的影響。
可見;雌性果蠅半數(shù)死亡期延長的幅度為34.8 ~83.2 ,雄性果蠅半數(shù)死亡期延長的幅度為4 6 ~83.9 。除0.2 組雄性果蠅外,其余各組雌雄果蠅半數(shù)死亡期與對照組比較,差別均有顯著性。
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2.2.2 牛初乳粉對果蠅平均壽命的影響。
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可見:雌性果蠅平均壽命延長幅度為17.7 ~40.1 ,雄性果蠅平均壽命延長幅度為13.7 ~30.7%。
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2.2.3 牛初乳粉對果蠅最高壽命的影響。
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牛初乳粉延長了雌性果蠅的最高壽命,幅度為3.5 ~8 1 ,中、高劑量組與對照組比較,差別有顯著性;各劑量組雄性果蠅最高壽命與對E 組比較,差別無顯著性。
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3 討論
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自由基是一類具有高度化學(xué)反應(yīng)活性的含氧基團(tuán),主要指超氧陰離子•07和氫氧自由基•OH,它們是需氧生物體內(nèi)代謝正常產(chǎn)物,在機(jī)體內(nèi)具有殺菌和參與前列腺素合成等積塤作用。在正常情況下,機(jī)體代謝不斷產(chǎn)生自由基,同時(shí)又不斷被機(jī)體存在的酶促和非酶促系統(tǒng)清除。隨著增齡,機(jī)體清除自由基的能力減弱,過剩的自由基睫組織細(xì)胞生物大分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞性改變,組織器官的機(jī)能逐步發(fā)生紊亂,機(jī)體逐漸趨于衰老。MDA是細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之~,溯定其含量可間接估計(jì)脂質(zhì)過氧化的程度,它能與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián),產(chǎn)生脂褐質(zhì),此物是老年斑的主要成份 MDA含量的增加除了與上面提到的自由基生成異常有關(guān)外,還可能是由于機(jī)體瞻質(zhì)過氧化保護(hù)系統(tǒng)的抗氧化能力降低所致 本實(shí)驗(yàn)觀察到喂高劑量牛初乳的小鼠肝、心肌組織MDA含量明顯低于對照組,表明牛初乳扮可以提高小鼠機(jī)體的抗氧化能力,降低MDA含量。
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生物體內(nèi)存在多種防御自由基損傷的抗氧化酶類,SOD和GSH Px是比較重要的兩種:SOD能催化•0f生成H 0 ,以清除•O 對細(xì)胞的毒害作用。GSH-Px是帆體存在的一種含酉清除自由基的酶系統(tǒng),可將 O 分解,阻斷脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng),它是反映機(jī)體抗氧化能力的重要因素 本研究結(jié)果表明,牛初乳粉中高劑量組小鼠腎、心肌組織SO D活力和高劑量組小鼠腎、肝、全血GSH-Px活力均明顯高于對照組小鼠,提示牛初乳粉可以通過提高機(jī)體抗氧化酶的生物合成而增加活力束抑制機(jī)體的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。
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周之輝等用隨機(jī)雙盲對照法在老年人群中服用牛乳提取物(BCE)3個(gè)月.觀察抗衰老作用。結(jié)果表明,BCE能提高老年人體內(nèi)總超氧化物岐化酶(SOD)和錳一超氧化物岐化酶(Mn SOD)活力,降低脂質(zhì)過氧化物含量。馬寧 、等用牛初乳制劑喂養(yǎng)_犧尿病大鼠15 d后,紅細(xì)胞SOD活力明顯高r}}通飲食組小鼠,而MDA含量則降低;葉惟冷吼等給嚴(yán)重燙傷人鼠服l啊牛初乳脂質(zhì)營養(yǎng)液25 d,顯著提高了太鼠體內(nèi)脂溶性維生索、3_胡蘿l、素和SOD的水平、降低了LPO 的含量:配喝牛初乳具有機(jī)自rh基損傷的作用。本研究結(jié)果與上述報(bào)道的結(jié)果具響一致性。
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從本文結(jié)果可見,牛初乳粉延長了雌雄果蠅的半數(shù)死亡期和平均壽命以盟雌性果蠅的最高壽命。在抗衰老藥物的評定標(biāo)準(zhǔn)方面有兩種不同意見:一些學(xué)者認(rèn)為能延長生物平均壽命的藥物屬抗衰老藥物,另一些學(xué)者則認(rèn)為只有能延長生物齲高壽命的藥物屬抗衰老藥物。葉恩賜 等認(rèn)為半數(shù)死亡天數(shù)町代替千均壽命或是高壽命作為果蠅壽命試驗(yàn)的指標(biāo)。從果蠅壽命試驗(yàn)的整體結(jié)果來看,牛初乳粉延長了果蠅的壽命。牛初乳粉對果蠅壽命的影響如同對小鼠體內(nèi)抗氧化酶和過氧化脂廄的影響一樣,總的趨勢都是高濃度優(yōu)于中、低濃度。并且在延長黑腹果蠅半數(shù)死亡期、平均壽命及最高壽命方面表現(xiàn)出性別上的差異,即對雌性果蠅效果優(yōu)于雄性果蠅;這種差異是什么因素造成的尚有待研究。
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