據(jù)中科博生了解，多年來，癌癥研究人員都在試圖解答為何經(jīng)過了成功的化療或者放療的患者，還是會出現(xiàn)復(fù)發(fā)呢，這個問題直到上個世紀(jì)70年代末的時候，癌癥干細(xì)胞假說出現(xiàn)，科學(xué)家們假定了一小部分的癌細(xì)胞可以無限期地自我更新，從而引起不同細(xì)胞類型的腫瘤。這一假說也解釋了為什么許多癌癥藥物會對標(biāo)準(zhǔn)的治療進(jìn)程產(chǎn)生抗藥性：這些藥物并沒有影響到干細(xì)胞群。中科博生。
如果這一假說成立，那么針對癌癥干細(xì)胞的藥物也許能完全治愈癌癥。也也就是為何時至今日，這么多科學(xué)家們都在努力研究癌癥干細(xì)胞，了解它們是如何在癌癥治療后繼續(xù)生存的。最早研究人員是在1997年發(fā)現(xiàn)了急性髓系白血?。ˋML）血液樣品中的癌癥干細(xì)胞，但是由于采用表面標(biāo)記物證明實體腫瘤中癌癥干細(xì)胞的存在，常常會出現(xiàn)不一致的結(jié)果，因此這一理論也引發(fā)了激烈的討論。中科博生。
但是近年來科學(xué)家們在所有癌癥類型（膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌）中發(fā)現(xiàn)了具有自我更新能力，啟動腫瘤發(fā)生的細(xì)胞，因此討論不再圍繞著“癌癥干細(xì)胞是否存在？”了，而是變成了“癌癥干細(xì)胞的類型有多少種？”中科博生。
要想了解癌癥干細(xì)胞并不容易，其中一大阻礙就是癌癥干細(xì)胞的獲得，許多醫(yī)院會對腫瘤樣品進(jìn)行冷凍切片，而要從解凍組織中獲得可用的細(xì)胞就沒有從新鮮樣品中取樣那么簡單了。另外一個問題在于根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)記分離高純度的細(xì)胞群。中科博生。
如何處理患者樣品
來自多倫多大學(xué)的John Dick教授是癌癥干細(xì)胞研究的鼻祖，就是他在做實驗的時候發(fā)現(xiàn)，并不是所有的癌細(xì)胞都是經(jīng)歷相同的步驟發(fā)展而來的。尤其是其中小部分的具有自我更新能力的白血病細(xì)胞能發(fā)展成腫瘤，由此他將能發(fā)育成腫瘤的變異細(xì)胞命名為癌癥干細(xì)胞。中科博生。
對于樣品處理，他認(rèn)為能否從臨床醫(yī)生那里獲得新鮮組織是成功分離出癌癥干細(xì)胞的關(guān)鍵，即使這很困難，但是用移液器或輕輕從患者樣品切片，并將其放置在冰上，能最大限度的保存可用的分離細(xì)胞。中科博生。
從患者樣品中分離癌癥干細(xì)胞的第一步就是保存腫瘤的單一細(xì)胞懸浮液。對血液腫瘤進(jìn)行研究的好處在于癌細(xì)胞已經(jīng)存在于單一細(xì)胞懸浮液中了，通過已有的Ficoll分離手冊，就能將其與紅血細(xì)胞和血小板分離開來。同時為了放置Ficoll溶液濺出來，來自斯坦福大學(xué)的Christopher Dove建議在試管下面放一個玻璃巴氏滴管，這樣就能通過滴管將溶液倒出來。淋巴細(xì)胞零污染十分關(guān)鍵：如果你認(rèn)為紅細(xì)胞可能也帶進(jìn)去了，那么就需要重做Ficoll分離。中科博生。
如果要處理冷凍過的血液樣本，Dove建議將冷凍樣品轉(zhuǎn)移到DNase溶液中，用以降解在快速凍融過程中細(xì)胞死亡產(chǎn)生的DNA，這些DNA很“粘”，會將細(xì)胞黏在一起，加入DNase就能保持單細(xì)胞懸浮狀態(tài)?！叭绻憬鈨隽?000萬個細(xì)胞，但結(jié)果只計數(shù)到了300 萬個細(xì)胞，不知道其它3700 萬個細(xì)胞去哪兒了，那么就可以嘗試DNase，”他建議道。中科博生。
另一方面，對于實體腫瘤來說要得到單細(xì)胞溶液就需要進(jìn)行機(jī)械和化學(xué)處理了，這個過程常常會造成細(xì)胞損傷，因此研究人員需要額外注意使用的酶，例如，應(yīng)避免使用胰蛋白酶，這種酶通常在培養(yǎng)過程中用于通行細(xì)胞，會清除細(xì)胞表面標(biāo)記物，造成后期無法檢測干細(xì)胞。中科博生。
來自多倫多大學(xué)的Catherine O’Brien則采用了一種作用溫和的酶：TrypLE Express，也可以用膠原酶作為胰蛋白酶的替代物，通常1厘米大小的腫瘤正合適，可以獲得可用的產(chǎn)物溶液。而來自哥倫比亞大學(xué)的病理和細(xì)胞生物學(xué)教授Piero Dalerba建議根據(jù)不同的腫瘤類型調(diào)整酶的種類和用量，比如大腸癌細(xì)胞生長在單層里，因此較易從患者組織中分離開來，對于這些更難的腫瘤，Clevers建議用膠原酶浸泡過夜。
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