一
校正圖片的光密度
1.校正圖片的光密度
2.新建一個(gè)新的校正參數(shù)
3.單擊image后，出現(xiàn)彈窗后，鼠標(biāo)單擊圖片空白處背景（一般數(shù)值應(yīng)該在230左右），點(diǎn)擊ok。
4.命名，然后點(diǎn)擊system。
二
測(cè)量參數(shù)的設(shè)置
1.下圖第3步，除了選中IOD,應(yīng)同時(shí)選上area（左側(cè)選上area，IOD即可），通過調(diào)節(jié)area的范圍，分析時(shí)可以很好的剔除面積很小的點(diǎn)（一般IOD的范圍不用改變）。
2.option 選項(xiàng)需要設(shè)置的有輪廓樣式（根據(jù)圖片選擇），是否剔除邊界的染色（一般選擇none），以上設(shè)置好后，點(diǎn)擊ok。
3.下圖第5步選中后，直接鼠標(biāo)點(diǎn)擊染色部位（我一般從深到淺）至染色部分全部選中。按照步驟保存好方法后，點(diǎn)擊close 然后直接點(diǎn)count。
三
1. 保存好設(shè)置好的方法后，接下來，按照前面的步驟，直接file→load file剛才保存的方法進(jìn)行count就行了。
2.查看分析結(jié)果、導(dǎo)出結(jié)果。（點(diǎn)擊view-statistics就能出現(xiàn)結(jié)果）
注：
（1）點(diǎn)擊file后可出現(xiàn)數(shù)據(jù)結(jié)果導(dǎo)出路徑；
（2）如果分析的組織是占滿整個(gè)圖片，直接看總的IOD值就行了。若不是，我們還應(yīng)計(jì)算目標(biāo)的面積，然后用IOD/area，這樣得到的結(jié)果才更加的準(zhǔn)確。
Tips
1. 拍攝時(shí)，光源亮度、曝光時(shí)間應(yīng)一致（不要使用自動(dòng)曝光）。
2. 拍照前，應(yīng)在空白背景處進(jìn)行白平衡校正。（個(gè)人觀點(diǎn)：拍照時(shí)盡量讓照片整體亮一點(diǎn)，每次我顯微鏡的專業(yè)軟件拍完照片后，覺得挺好的，但是放PPT上或分析時(shí)一看整體有點(diǎn)暗。）
3. 專業(yè)相機(jī)拍照時(shí)，應(yīng)保存TIFF格式（TIFF是一種靈活的位圖格式）。
image-Pro plus（IPP）是一種專業(yè)的圖像分析軟件
IPP能隨意對(duì)圖象切割、測(cè)量、計(jì)數(shù)、分類（材料學(xué)粒子粒徑測(cè)量，生物學(xué)細(xì)胞或組織大小測(cè)量等）；HE等染色方法的陽性灰度、陽性比例計(jì)算；簡單電泳條帶分析；熒光強(qiáng)度分析等?？梢赃x擇面積、周長、角度等50多種測(cè)量方式。
圖像分析方面：
IPP能夠熒光共位性分析；空間和灰度校對(duì)；將測(cè)量結(jié)果以統(tǒng)計(jì)值、單個(gè)測(cè)量值、三維濃度圖和線形等方式輸出，并可以將測(cè)量結(jié)果輸出到EXCEL中處理。
而上文提到的免疫組化結(jié)果處理僅是其眾多應(yīng)用中的一種，希望大家可以充分的利用這個(gè)工具，更好地處理自己的科研結(jié)果。
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